OLFM4 mRNA与核仁素蛋白的相互作用研究

来源 :重庆医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:jxsdvc6
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
目的:嗅觉介导素4(OLFM4)基因又称为GW112,hGC-1,在多种肿瘤中高表达,研究表明OLFM4在肿瘤发生发展中起重要作用,但结果并不一致,这显示OLFM4的作用存在细胞和组织特异性。本研究主要探讨OLFM4mRNA与核仁素(Nucleolin, C23或NCL)蛋白之间是否存在相互作用,以及核仁素对OLFM4转录水平的调控。方法:构建过表达核仁素质粒GC146-Ncl和阴性对照质粒GV-142以及敲低核仁素质粒pGenesil-1.1-Si和敲低阴性对照质粒pGenesil-1.1-HK,分别转染SGC-7901和293-T细胞,用western blot鉴定C23蛋白表达水平。将上述质粒分别与OLFM4-报告基因质粒共转染,分析核仁素对OLFM4活性的影响。收集SGC-7901细胞核染色质,孵育细胞核染色质和核仁素,进行蛋白质-RNA免疫共沉淀后,提取RNA,用RT-PCR检测与蛋白质结合的mRNA类型。结果:构建的过表达质粒GC146-Ncl和阴性对照质粒GV-142以及敲低(knock down)质粒pGenesil-1.1-Si和敲低阴性对照质粒pGenesil-1.1-HK,分别转染细胞,48h后荧光率达60%。western blot结果显示,核仁素过表达组中核仁素表达上调,核仁素敲低组中核仁素表达下调,分别与它们的阴性对照组相比。双荧光素酶报告基因实验结果显示,SGC-7901细胞中过表达质粒GC146-Ncl的相对荧光素酶活性约为对照质粒的1.15倍(P<0.05),敲低质粒pGenesil-1.1-Ncl的相对荧光素酶活性约为对照质粒的0.8倍(P<0.05);293-T细胞中过表达质粒GC146-Ncl的相对荧光素酶活性约为对照质粒的1.7倍(P<0.05),敲低质粒pGenesil-1.1-Ncl的相对荧光素酶活性约为对照质粒的0.5倍(P<0.05)。确定了合适的超声波破碎条件:即输出功率40%,每次1s,间隔30s,共30次。蛋白质-RNA免疫共沉淀后RT-PCR结果显示,扩增出OLFM4基因490bp片段和Bcl-2基因153bp片段。结论:核仁素与OLFM4mRNA可以相互结合,且核仁素可以通过增加OLFM4转录水平和延长OLFM4mRNA的半衰期来增加OLFM4mRNA的稳定性。
其他文献
<正> 我国第一批500千伏输电线路的塔头尺寸比国外的大,主要是绝缘配合设计中存在问题,如绝缘子串太长、要求的空气间隙较大、风偏设计不符合实际等,有必要加以改进。在保证
在高校开展音乐美育教育,有利于提高思想政治教育的实效性,有利于促进大学生提高综合素质.开展音乐美育教育应注重教育手段的创新;既要重视传承传统文化,又要注意吸收西方精
:人才是发展的决定性因素,而人才的意识特质却又是决定人才能力倾向的重要条件。随着低碳经济的兴起,物流行业急需低碳物流人才的加入,使低碳物流人才的界定给学术界带来了新
本文对译者在不同历史时期的地位和主体性的研究进行梳理,通过解构主义理论、语言顺应理论、操纵学派理论探讨了译者主体性的内涵。基于上述研究,本文从译者主体性的视角分析
目的:研究表明抑癌基因启动子区CpG岛的甲基化导致抑癌基因表达失活是导致肿瘤发生的机制之一。本实验旨在通过研究结直肠腺癌、腺瘤患者及正常人中P16基因和Ras相关结构域家
学业情绪是影响学生学业成绩、学习动机的一个重要的非智力因素,关系到学生的成长和发展。结合"以人为本"的教学理念,分析成就动机、自我概念、归因方式等内部因素,教师教学
目的:探讨过敏性紫癜病因、复发及影响其预后的临床因素。方法:对随访资料完整的58例过敏性紫患儿进行回顾性分析。结果:①无明确诱因27例(46.55%),有明确诱因31例(53.40%)。
固定资产出租收入属于租赁性质的劳务收入。企业出租房屋及建筑物等取得的租金收入涉及营业税、所得税、城建税、教育费附加、印花税、房产税。如果是房屋出租,对于房产税还
英语中名词化结构使文本更加正式、严肃、客观,名词化结构使用的频率越高,文本的正式程度就越高。因此,在英文法律文本中,名词化结构的使用非常广泛。然而,名词化会使得文本
血管生成主要包括病理性及生理性血管生成2个方面,新生血管形成在多种疾病致病中发挥重要作用,主要包括肿瘤血管、眼底新生血管疾病(黄斑变性、糖尿病视网膜病变等),在新生血