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弯曲菌(Campylobacter spp.)是一种重要的食源性病原菌和人畜共患病原菌,弯曲菌感染是导致人类细菌性肠胃炎的主要原因。本实验在从四川省成都市某肉鸭加工公司分离鉴定的220株弯曲菌的基础上,进行耐药性分析、毒力相关基因的PCR检测及PFGE分型,主要结果如下。1肉鸭屠宰链弯曲菌株的分离及鉴定2015～2016年,从肉鸭屠宰链共采集样品656份,其中肉鸭盲肠样227份,屠宰过程中脱毛环节(鸭白条体表棉拭子、水样)样品138份,掏膛环节(鸭白条体表棉拭子、水样)样品155份,宰后鸭翅、鸭脚、鸭白条136份,根据GB 4789.9-2014的方法,并参照文献以弯曲菌属的16S rRNA基因、结肠弯曲菌的特异性基因ceuE和空肠弯曲菌的特异性基因hipO为靶基因合成三对特异性引物,对疑似菌株进行三重PCR鉴定。结果显示从样品中鉴定出弯曲菌220株,其中空肠弯曲菌109株、结肠弯曲菌103株,其他弯曲菌8株。弯曲菌总体分离率为33.54%,空肠弯曲菌和结肠弯曲菌分离率占弯曲菌分离菌株96.36%,屠宰前粪样、脱毛环节、掏膛环节、宰后鸭肉样中弯曲菌的分离率分别为79.3%、6.52%、18.71%、1.47%。2肉鸭屠宰链弯曲菌分离菌株药敏试验结果采用微量肉汤稀释法,对220株弯曲菌分离菌株进行8种抗菌药物的敏感性实验,结果表明,弯曲菌对TET的耐药率最高,为96.36%,CLI次之为92.27%,对CIP、GEN、CHL的耐药率相对较低,分别为37.27%、41.36%、42.73%;对ERY、NAL的耐药率处于中等水平分,别为47.27%、44.45%;对AZI耐药率中等偏高为66.82%;共产生了 47种耐药谱,多重耐药率为75.91%。空肠弯曲菌、结肠弯曲菌和其他弯曲菌分别产生了 33、27、4种耐药谱,多重耐药率分别为71.56%、79.61%、87.50%。屠宰前、脱毛环节、掏膛环节、屠宰后弯曲菌分别产生了 40、6、14、2种耐药谱,多重耐药率分别为78.33%、77.78%、58.62%、100%。3肉鸭屠宰链弯曲菌分离株毒力基因检出情况(1)弯曲菌分离株毒力基因检出情况220弯曲菌对粘附定值基因cadF的检出率为100%,对入侵基因iamA、ciaB的检出率为71.82%、42.73%,能动基因flaA的检出率为77.27%,趋化基因cheY的检出率为92.73%,致病基因cdtA、cdtB、cdtC的检出率分别为60%、92.27%、54.09%,对质粒基因virB11基因的检出率最低为7.73%。220株弯曲菌分离菌株中,携带5～9个毒力基因的有183株,占总分离菌株的83.18%,其中,1株菌携带了所检测的9个毒力基因,37株菌携带了 8个毒力基因,59株菌携带了 7个毒力基因。携带5～9个毒力基因的空肠弯曲菌有104株,占95.41%的比例,携带5～9个毒力基因的结肠弯曲菌菌有76株,占分离菌株的73.79%。屠宰前、脱毛环节、掏膛环节、屠宰后弯曲菌检测出5～9个的毒力基因的菌株分别占各环节分离菌株的 81.67%、88.89%、93.10%、50.00%。(2)弯曲菌毒力基因谱型220株弯曲菌分离菌株对所检测的9个毒力基因一共产生了 48种毒力基因谱,其中大部分谱型是空肠弯曲菌或者结肠弯曲菌所特有。109空肠弯曲菌一共产生了 20种毒力基因谱,其中flaA、cadF、cdB、cheY、iamA、ciaB、dtC为优势谱型,56.59%的空肠弯曲菌检测到该谱型;103结肠弯曲菌一共产生了34种毒力基因谱,最优毒力基因谱型为flaA、cadF、cdtA、cdtB、cheY,占19.79%。屠宰前、脱毛环节、掏膛环节、屠宰后弯曲菌分别产生了 45、5、6、2种毒力基因谱。4肉鸭屠宰链弯曲菌的PFGE分型采用SmaⅠ对随机选取的68株鸭源弯曲菌进行酶切,PFGE分型结果显示,35株空肠弯曲菌PFGE条带相似性在36.00%～99.80%之间,产生了 15种谱型,33株结肠弯曲菌PFGE条带相似性在28.93%～100.00%之间,产生了 11种谱型。综上所述,鸭源弯曲菌总体分离率为33.54%,主要为空肠和结肠弯曲菌的污染,且以空肠弯曲菌为主,弯曲菌的分离率从屠宰前到屠宰后总体呈下降趋势。鸭源弯曲菌对抗生素的耐药状况比较严重,多重耐药现象较为普遍;结肠弯曲菌的耐药率比空肠弯曲菌高,屠宰后所分离的弯曲菌对抗生素产生了较高的耐药性。毒力基因广泛存在于弯曲菌分离菌株中,大部分空肠弯曲菌比结肠弯曲菌携带有更多的毒力基因,表明弯曲菌致病性受多种因素影响。肉鸭屠宰加工过程中存在交叉污染,且在肉鸭屠宰生产链中弯曲菌有从屠宰上游环节传播到下游环节的趋势。