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产酶溶杆菌(Lysobacter enzymogenes)是一种新型的生防细菌。本实验室从辣椒根际土壤中分离得到一株产酶溶杆菌(Lysobacter enzymogenes)OH11,该菌GC含量较高,有滑行现象,可以产生几丁质酶、蛋白酶、纤维素酶、β-1,3-葡聚糖酶在内的多种胞外酶。此外,产酶溶杆菌之所以对许多植物病原菌具有很好的拮抗活性,主要得益于其产生的次生抗菌物质:一种结构和作用方式全新的广谱抗真菌卵菌物质HSAF(Heat Stable Antifungal Factor)以及抗革兰氏阳性细菌的活性物质WAP8294A2,但HSAF和WAP-8294A2生物合成的调控机制仍不清楚。Hfq在细菌中是一种高度保守的RNA伴侣蛋白,参与基因的转录和转录后调控,Hfq有着多样化的功能例如影响生长,对H2O2的耐受能力以及毒性,本研究的目的是在产酶溶杆菌OH11中明确Hfq的功能。 本文通过生物信息学分析,结合NCBI数据库中的大肠杆菌和黄单胞科细菌的基因组信息,从自主测序的OH11基因组中鉴定了Hfq蛋白。序列分析表明:产酶溶杆菌中Hfq蛋白含有91个氨基酸,与Escherichia coli str.K-12 substr.MG1655的Hfq蛋白有75%的同源性,与Xanthomonas campestris pv.campestris str.ATCC33913的Hfq蛋白89%同源性。产酶溶杆菌中的hfq基因与大肠杆菌中hfq基因一样位于miaA-hfq-hflX-hflK-hflC基因簇中。 为了研究Hfq在产酶溶杆菌OH11中的功能,我们构建了hfq缺失突变菌株以及用基因组无标记替换法构建了其互补菌株△hfq(hfq)△αlp。我们发现hfq缺失突变后,其生长能力以及对SDS的耐受能力降低,菌落边缘变得平滑但不影响表面滑动能力,表明hfq参与调控了细菌生长、环境应答及菌落形态。与野生型相比,hfq突变体合成HSAF和WAP-8294A2的能力显著增加,对水稻纹枯病菌Rhizoctonia solani和小麦赤霉病菌Fusarium graminearum的拮抗活性也提高。揭示hfq参与调控了次生代谢物质HSAF和WAP-8294A2的生物合成。此外,hfq突变株无法在培养基中降解几丁质,进一步发现突变株这种能力的缺失与几丁质酶A的合成量显著下降以及外泌能力的丧失密切相关。本研究首次报道了hfq基因在产酶溶杆菌中可以调控生长、环境应答、菌落形态,次生代谢物质的合成以及几丁质酶的合成和外泌。