桦褐孔菌(Inonotus Obliquu LNUF008)三萜类物质活性分析及鲨烯合酶基因克隆

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桦褐孔菌作为一种珍贵的药用真菌,其药用和保健功能的多样性已经引起人们的广泛关注,它具有的抗癌、治疗心脏病、降血糖等功效很早就被人们所利用,自16世纪以来桦褐孔菌就被东欧、俄罗斯、波兰、芬兰等民间广泛利用来防治各种疑难杂症,三萜类物质是桦褐孔菌有效成分中的主要物质,鲨烯合酶是三萜类物质合成的关键酶,它催化两分子的法呢酯焦磷酸(Farnesyl di phosphate,FPP)缩合产生鲨烯(Squalene)。鲨烯作为前体物质进一步合成三萜、甾醇、胆固醇等萜烯类物质。所以鲨烯合酶的活性和含量决定了次级代谢产物三萜类物质的产量。鉴于三萜类物质的药理和保健功能鲨烯合酶的研究备受关注。本研究以辽宁大学实验室保存的桦褐孔菌(Inonotus Obliquus LNUF 008,中国典型培养物保藏中心保藏,编号为CCTC M 209280)为活性菌株,首先根据其他物种鲨烯合酶的同源性较高的序列设计兼并引物,PCR扩增出桦褐孔菌鲨烯合酶的部分序列,再根据已知的序列设计桦褐孔菌鲨烯合酶的特异性引物,经RT-PCR与RACE相结合获得桦褐孔菌鲨烯合酶的基因序列。实现桦褐孔菌鲨烯合酶基因的定位和克隆,为桦褐孔菌有效成分的进一步研究奠定了工作基础。随着人们对桦褐孔菌价值的广泛认识,也使桦褐孔菌资源被不断消耗,加之目前桦褐孔菌还无法进行规模化人工培养,致使子实体资源面临枯竭,鉴于桦褐孔菌子实体资源所处的现状,研究者已经开始了对桦褐孔菌菌丝体资源的培养,试图找到桦褐孔菌子实体的替代品,本文分别对桦褐孔菌野生子实体和人工培养的菌丝体进行有效成分三萜类物质的提取,并对其含量和抑菌实验分别进行了测定,实验结果显示以桦褐孔菌菌丝体代替子实体生产活性物质的可行性与实用性,为桦褐孔菌菌丝体的进一步研究提供了依据。
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