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目的:建立脑缺血再灌注损伤模型,观察磷酸肌酸对脑细胞损伤的保护效果,通过对大鼠海马组织即刻基因c-fosmRNA基因表达的检测,探讨损伤时磷酸肌酸对脑的保护作用和机制。方法:本实验选用体重在300-350g之间的27只健康成年雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠作为研究对象,随机分组:1、假手术组(Sham组,n=9):麻醉(10%水合氯醛,350mg·kg-1腹腔注射)后颈部正中切口,分离出两侧颈总动脉但不夹闭,暴露30min;2、缺血再灌注组(I/R组,n=9):麻醉后分离并夹闭双侧颈总动脉30min,松开动脉夹后再灌注24h;3、药物处理组(Drug组,n=9):麻醉后分离并夹闭双侧颈总动脉30min时松开动脉夹,同时从尾静脉缓慢注射磷酸肌酸(PCr,80mg·100g-1),再灌注24h。术后三组大鼠均放笼饲养24h后直接断头,在冰屑上迅速开颅取海马组织,左侧海马进行液氮速冻后放入-80℃冰箱保存以备采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)对c-fos mRNA的检测,右侧海马放入4%的甲醛保存以备免疫组织化学法进行检测。结果:两只大鼠因呼吸衰竭死亡,其余均度过观察期。Durg组的大鼠比Sham组大鼠精神状态佳,活力强。1、HE染色法结果比较:Sham组的神经细胞排列紧密、规则,形态结构基本正常;与Sham组相比,I/R组的神经元细胞排列散乱,细胞结构破坏,核碎裂、核固缩;与I/R组相比,Drug组大部分神经元细胞结构完整,排列有序;2、免疫组化染色观察c-fos基因表达结果比较:c-fos mRNA呈棕黄色的免疫阳性细胞在Sham组海马组织仅有少量表达,染色浅;I/R组大鼠海马组织中染色较深,且表达水平高;Drug组大鼠海马组织c-fos mRNA在细胞核内有所表达,与I/R组相比,染色减轻。3、RT-PCR技术检测结果比较:电泳图中三组β-actin电泳条带宽度和亮度无明显差别,I/R组的c-fos电泳条带宽厚、明亮;Sham组的c-fos mRNA条带模糊、暗淡;Drug组条带亮度介于两者之间。凝胶成像分析系统结果显示:I/R组的c-fos/β-actin比值大于Drug组(p<0.05);Drug组的c-fos/β-actin比值大于Sham组(p<0.05)。结论:1、脑缺血再灌导致的脑损伤注可以增加神经细胞c-fosmRNA的表达;2、磷酸肌酸可以降低c-fosmRNA的表达,保护脑细胞;3、C-fosmRNA可以作为脑损伤早期诊断的一个指标。