论文部分内容阅读
目的:本研究旨在观察兔早期椎间盘退变过程中有哪些情况发生改变,同时观察富血小板血浆干预兔早期椎间盘退变时影像学、细胞学、组织学发生哪些变化。方法:取60只健康3月龄左右的新西兰兔,体重2.0～3.0Kg。随机抽取数只家兔,分别于耳缘静脉采血5～10ml,各留2ml用于血小板计数,其余均分别行Landesberg二次离心法进行富血小板血浆的提取,提取完成后留少量富血小板血浆行血小板计数。将60只新西兰兔随机均分为5组,分别为空白对照组、假手术组、磷酸盐缓冲液(phosphate buffer saline,PBS)组、髓核细胞(nucleus pulposus cells,NPC)组和富血小板血浆(Platelet rich plasma,PRP)组。其中空白对照组不行任何处理,假手术组仅分离暴露椎间盘而不行椎间盘穿刺,其余三组均采用纤维环穿刺法建立兔椎间盘早期退变模型,穿刺节段为L1/2和L2/3。2周后所有实验兔均行MRI检测椎间盘退变情况,行椎间盘穿刺的三组实验兔再次行手术。PBS组:注射0.1mlPBS于退变椎间盘内;NPC组:注射0.1mlNPC(4*104个/ml)于退变椎间盘内;PRP组:注射0.1mlPRP于退变的椎间盘内。在干预后2、4、8周时,实验兔行细胞学、影像学、组织学、分子生物学检测,包括细胞培养、HE染色、Masson染色、MRI、PCR检测椎间盘退变情况。结果:1.显微镜下:各时间段空白对照组和假手术组的髓核细胞分布集落密集,细胞呈长梭形。PBS、NP、PRP组的髓核细胞分布集落稀疏,形态不一;2.Masson染色:PBS、NPC、PRP三组兔在建模干预第4周时行Masson染色,在10*10倍镜下均有蓝染和红染的区域。PBS组可见蓝染的胶原纤维较多,而NPC组蓝染的胶原纤维较PBS组少,PRP组胶原纤维最少。胶原纤维取代椎间盘基质的量越多,越不利于椎间盘退变的修复。因此,可以看出PRP组和NPC组胶原纤维较PBS组少,说明PRP和NPC在椎间盘退变的治疗过程中有一定的干预作用。HE染色:PBS、NPC、PRP组的HE染色中,细胞呈空泡状,符合髓核细胞特征,但PBS组细胞数量较少,散在稀疏,而NPC组和PRP组细胞数量较多,较为密集。因此可以推断,PRP和NPC在椎间盘退变的治疗过程中有一定的干预作用。3.MRI像示:空白对照组在实验进行过程中,各椎间盘均未发生明显退变;第一次假手术与第二次假手术后,该组实验兔各个椎间盘均未发生明显退变。说明手术本身不影响椎间盘发生退变。PBS不能改善或延缓椎间盘发生进一步退变。NPC在椎间盘退变的过程中有一定的干预作用,能够减缓退变,但并不能完全阻止椎间盘发生退变。PRP在椎间盘退变的过程中也有一定的干预作用,可以改善椎间盘退变,延缓退变进一步进展,但并不能完全阻止椎间盘发生退变。PRP干预椎间盘退变的效果和NPC没有明显差异。空白对照组和假手术组T2信号普遍较高,PBS、NP、PRP组T2信号较低。空白对照组和假手术组T2mapping数值均高于PBS、NP、PRP组。空白对照组和假手术组的椎间盘高度无统计学差异。相同干预时期的PRP、NPC、PBS组,椎间盘退变前后的高度差值无统计学差异。退变椎间盘干预第4周时,NPC、PRP组T2mapping差值较PBS组小,NPC、PRP组的T2mapping差值无统计学差异。干预第8周时,NPC、PRP组T2mapping差值较PBS组小,前两者T2mapping差值无统计学差异。4.PCR结果:基因检测指标如下:COL1A1、ColⅡ、Sox9。结果示髓核细胞组和PRP组在干预2周后Ⅰ型胶原基因表达升高,且有差异。PRP组在干预第4周时,Ⅰ型胶原基因表达也呈升高状态,而此时髓核细胞的Ⅰ型胶原基因表达并未出现增高状态。Ⅱ型胶原基因和Sox9基因表达也呈相同趋势,说明PRP和髓核细胞均能够不同程度的干预椎间盘退变的过程。而PRP能够更持久地维持退变椎间盘内髓核细胞的活性。结论:PRP能够有效延缓椎间盘退变的进展,其治疗椎间盘退变的效果与髓核细胞治疗椎间盘退变的效果无明显差异,二者对于椎间盘退变的进展都有一定的干预作用。