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双酚A(BPA)作为一种重要的化工原料,广泛应用于消费产品的生产制造如塑料瓶和食品容器,已对人类健康构成了严重威胁。因此,对其分析控制尤为重要。目前,对其分析测定常使用的方法有高效液相色谱法(HPLC)和酶联免疫吸附试验(ELISA)等,这些方法灵敏度高、特异性强,但因为它们复杂的预处理步骤或洗涤步骤使得这些方法既费时又费力。因此急需发展一种快速、灵敏度高、易于实现高通量检测的方法来定量分析环境样品中的BPA。 在本研究工作中,首先发展了一种基于纳米粒子对的单线态氧通道均相化学发光免疫法,实现了双酚A的定量检测。分别采用两种纳米颗粒为给体珠和受体珠,给体珠上修饰酞菁染料,受体珠上修饰二甲基噻吩的衍生物及三价铕的掺杂物。这两种纳米微珠通过特异性的生物反应如抗原-抗体和生物素-链霉亲和素的特异性反应形成粒子对。当给体珠受光照射时,其上的光敏剂会将周围的常态氧分子转化为单线态氧,生成的单线态氧迁移到受体纳米颗粒上并与发光物质反应,产生激发光。基于此,以环境雌激素双酚A为污染物模型,建立了一种竞争性的单线态氧通道均相化学发光免疫分析体系。实验操作是在384微孔板上进行的,因此可以实现双酚A的高通量筛选测定,其线性检测范围为10~1000 ng/mL,检测限为2.9 ng/mL,组内与组间精密度均小于5.1%。在实际环境样品自来水和河水中不同浓度的加标回收率均值为95.45~121%,并同高效液相色谱法做了比对,结果相关性很好。与已有的方法相比,该工作具有免洗涤、简单、快速、使用试剂量少、可以用于大量环境样品中双酚A的高通量测定等优点,但其灵敏度还有待进一步的提高。 根据单线态氧通道均相化学发光免疫分析原理,单线态氧的产生和扩散是决定于化学发光信号的关键因素。而纳米粒子如纳米金的加入可能会提高单线态氧的产生,基于此,我们在该体系中加入金纳米粒子来考察其对体系化学发光信号的影响。首先研究了纳米金对亚甲基蓝-二甲基噻吩-Eu(TTA)3液相体系化学发光信号的影响,结果表明体系在多次光照之后,纳米金表现出了信号增强作用,并且不同粒径的纳米金的增强效果不同。此外,还用原位静态注射法研究了纳米金、Eu(TTA)3和过氧化氢对受体珠-碳酸氢盐缓冲溶液体系的信号增强作用,结果表明三价铕络合物和过氧化氢可以增强该体系的化学发光信号,并且论证了单线态氧的产生。最后,在酶标仪检测中,研究了纳米金和过氧化氢对亚甲基蓝-受体珠-碳酸盐溶液体系信号的影响,结果表明纳米金和过氧化氢对该体系的化学发光信号有明显的增强,并且浓度越高增强效果越强。