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本研究采用一种抗缺血性心脏病选择的活性筛选测试模型,选用的细胞株为人脐静脉内皮细胞株ECV-304,以MTT法为主要检测手段的生物活性测试方法来对临床具有良好疗效的沙棘黄酮片原料药中的活性成分进行研究。据文献报道,沙棘果实中主要含有黄酮类(含量>9.5%)、三萜(熊果酸含量高达1.34-1.60%)和甾体类等化合物。 根据生物活性测试结果,选择了活性较好的聚酰胺柱层析70%乙醇洗脱部分进行进一步分离,并在活性指导下,利用硅胶柱色谱、Sephadex LH-20、ODS柱色谱、MPLC以及制备型高效液相色谱等分离手段,从沙棘原料药中共分离得到17个化合物,通过化学和谱学的方法鉴定了其中14个化合物。其中1个新化合物,2个是从该属植物中首次分离得到。 新化合物结构鉴定为:(2E)-3-甲基-4-(4’-羟基苯甲羧基)-2-烯-1-丁醇-1-O-β-D-葡萄糖苷[(2E)-3-methyl-4-(4’-hydroxybenzoyloxy)-2-ene-1-butanol-1-O-β-D-glucopyranoside](11)。 已知化合物结构鉴定为:2α-羟基熊果酸[2α-hydroxyursolic acid](1),熊果酸[ursolic acid](2),5,7,4’-三羟基-3′-甲氧基黄酮醇[5,7,4′-trihydroxyl-3′-methoxyflavanonol](Isorhamnetin)(3),5,7,3′,4′-四羟基黄酮醇[5,7,3′,4′-tetrahydroxyflavanonol](Quercetin)(4),胡萝卜甙[Daucosterol](5),5,7,4′-三羟基黄酮醇[5,7,4′-trihydroxyflavanonol](Kaempferol)(6),邻苯二甲酸二丁酯[Phthalic acid dibutyl ester](7),槲皮素-3-O-B-D-葡萄吡喃糖苷[Quercetin 3-O-β-D-glucopyranoside](8),5,7,4’-三羟基黄酮醇-7-O-α-L-鼠李吡喃糖苷[5,7,4’-trihydroxyflavanonol-7-O-α-L-rhamnopyranoside](9),3,4,2′-三羟基查耳酮-4′-O-β-D-葡萄吡喃糖苷[3,4,2′-trihydroxychalcone-4′-O-β-D-glucopyranoside](10),5,4′-二羟基-3″-羟甲基-2″-(4′″-羟基-3′″甲氧基苯基)-1,4-二氧六环[5,6:7,8]黄酮醇[5,4′-dihydroxyl-3″-hydroxymethyl-2″-(4′″-hydroxyl-3′″-methoxyphenyl)-1,4-dioxane[5,6:7,8]flavanonol](Crenulation)(12),豆甾醇[Stigmasterol](13),β-谷甾醇[β-sitosterol](14)。其中化合物9,12为首次从该属植物中分离得到。 经活性追踪分离得到并鉴定了结构的14个化合物中有7个是黄酮类化合物,2个三萜类和3个甾醇类化合物,说明沙棘中活性部位主要还是集中于量大的黄酮、三萜和甾体类物质。本文在化学实验及生物活性测试的基础上阐明了沙棘的抗缺血性心脏病的物质作用基础为除了长久以来一直公认的黄酮、甾醇类物质之外还有其他三萜,脂肪酸酯类物质,这类物质在体内有可能起着至关重要的作用,它们的作用机理以及作用靶点还有待进一步研究。本文的研究结果为沙棘这一中成药的二次开发,提供了一定的理论与实验基础。