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研究目的:胃癌是中国乃至全世界最常见的恶性肿瘤之一,在胃癌的发展过程中,遗传和表观遗传的改变可以导致癌症的渐进转化。本文研究人血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)对组蛋白去甲基化酶 RBP2 的调控机制,从而探索VEGF在癌症发展过程中的新机制,明确这一新的分子机制对胃癌诊断和治疗的潜在作用。研究方法:1.在组织水平上,用实时定量PCR和免疫组织化学的方法检测15对标本(胃癌组织和癌旁正常组织)中VEGF和RBP2的水平,通过比较VEGF和RBP2在胃癌和癌旁组织中的表达水平,初步探索两者之间的相关性。2.在分子水平上,通过人重组VEGF蛋白(rhVEGF)和VEGF小干扰RNA处理胃癌细胞系,从mRNA水平和蛋白水平检测VEGF对RBP2表达的影响。之后加入rhVEGF,利用特异的VEGF下游信号通路抑制剂检测RBP2以及JNK信号通路的表达情况。通过功能性回复实验研究VEGF通过JNK信号通路调节RBP2表达的可能性。3.在动物水平,裸鼠皮下注射VEGF稳定干扰和加入rhVEGF的胃癌细胞系BGC-823,实时监测肿瘤的形成和体积变化,15天后麻醉处死,分离瘤组织,通过免疫组化以及qPCR的方法检测RBP2的表达情况。结果:1.与正常组织相比,胃癌组织中VEGF和RBP2均表达升高,并且VEGF和RBP2的表达具有正相关性。2.加入rhVEGF诱导的胃癌细胞系中RBP2表达升高。抑制胃癌细胞系中VEGF的表达,RBP2表达则相应降低。进而,我们使用VEGF下游信号通路的特异性信号通路抑制剂,发现JNK通路在VEGF诱导RBP2的表达中起重要作用。Western blot的结果显示加入VEGF诱导的胃癌细胞系中JNK蛋白的磷酸化以及下游关键分子P53的表达均降低。3.通过QRT-PCR和Western blot证实,即使是在干扰RBP2的表达后,加入rhVEGF仍然可以部分回复RBP2的表达。克隆形成实验和细胞侵袭迁移实验证明VEGF可以部分回复因为干扰RBP2而引起细胞增殖和侵袭能力降低的效应。4.在裸鼠实验中也证实了 VEGF的作用。将裸鼠分为对照组、VEGF沉默表达以及rhVEGF三组,证明了 VEGF在肿瘤生长的作用。同时QRT-PCR和免疫组织化学实验同样显示出在体内的VEGF和RBP2的正相关性。结论:VEGF在胃癌的发展过程中,可以通过JNK信号通路调节组蛋白去甲基化酶RPB2的表达,该研究阐释了 VEGF的一个新机制,进一步确定了其在胃癌发生发展中的重要的作用,为其作为药物靶点提供了更好的理论依据。