葡萄糖醛酸产生菌的筛选及培养条件研究

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目前葡萄糖醛酸的制备主要采用化学工艺法,但实际生产过程中化学法仍存在着许多亟待解决的问题。结合现有问题,本论文提出利用微生物法生产葡萄糖醛酸的途径,即细菌通过发酵培养,产生富含葡萄糖醛酸的荚膜多糖,为葡萄糖醛酸的工业化生产提供一个新思路,在节能和环保方面具有重要意义。从农冠13号复合菌粉中分离纯化菌株JZYB@-1和实验室保藏菌株复壮出JZYB@-2,该菌株产生富含葡萄糖醛酸的荚膜多糖。筛选培养基为阿须贝无氮培养基。经生理生化鉴定,JZYB@-1和JZYB@-2为硅酸盐细菌,分类属于胶质芽孢杆菌属。最终确定JZYB@-1为后续试验菌株。运用单因素试验、正交试验和响应面优化试验相结合的方法初步优化了JZYB@-1产多糖的液体培养条件,提高了多糖产率,为进一步扩大发酵生产规模,生产葡萄糖醛酸奠定了基础。该试验部分包括培养基的优化和发酵条件的优化。培养基的优化结果为:葡萄糖2.5%、MgSO4·7H2O0.8g/L、K2HP041.8g/L、不添加氮源,该培养基条件下多糖产率为3.39 g/L。发酵条件优化结果为:温度34℃、接种量6%、转速220r/min、pH7.5、装液量50mL/250mL锥形瓶、种龄48h、培养6d,该发酵条件下多糖产率为5.15 g/L。用碱提醇沉法从发酵液中提取得到多糖粗品,经DEAE-Cellulose离子交换柱层析分离后,将多糖分级并收集到多糖主峰,命名为EPS-I,占多糖总量的79.0%。将得到的多糖产品进一步用SephadexG-100凝胶色谱法纯化,EPS-I纯品得率为98.6%。初步鉴定其组分为葡萄糖醛酸,用硫酸咔唑法测得EPS-I纯品中葡萄糖醛酸的含量为39.2%。高效液相色谱法测得多糖水解后的葡萄糖醛酸含量为32.7%。
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