【摘 要】
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以柠檬酸生产菌黑曲霉(Aspergillus niger) Wm-01为出发菌株,通过60Co-γ射线、硫酸二乙脂(DES)及激光的复合诱变,采用高酸、高渗培养基筛选,从246株突变株中筛选出一株以木
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以柠檬酸生产菌黑曲霉(Aspergillus niger) Wm-01为出发菌株,通过60Co-γ射线、硫酸二乙脂(DES)及激光的复合诱变,采用高酸、高渗培养基筛选,从246株突变株中筛选出一株以木薯粉为原料的柠檬酸发酵高产菌株Wml-016,其发酵温度为39±1℃,发酵周期72小时,22%木薯粉液化液培养基摇瓶(平均总糖17.9%),平均产酸达17.2%。在50L自动发酵罐上研究了木薯原料去渣清液柠檬酸发酵工艺,探索了pH、温度、通风等工艺条件,以提高转化率,增加柠檬酸产率。黑曲霉Wml-016的最适发酵条件为:添加3.0%玉米浆补充氮源;进行分批发酵时最佳初糖浓度为16.0%,补料发酵时最佳初糖浓度为12.0%;最佳接种量为106个孢子/ml;Mg2+对产酸没有影响,无需添加;甲醇对产酸有促进作用,最适添加量为0.2%;初始pH值自然;可适应38~40℃高温发酵;通风量:0~24小时为0.12 VVM,24~64小时(发酵结束)为0.15 VVM。在此条件下,在150m3大罐上进行了大生产试验,平均产酸可达16.1%,转化率为98.5%,周期为67小时。在批式发酵优化条件的基础上,通过对补料液的组成、补料方式、流加起始时间、流加间隔时间等对柠檬酸发酵过程的主要参数,如产酸率、转化率、发酵周期、残糖等的影响进行了研究,确定了柠檬酸补料发酵的优化条件,即:补料液中木薯糖化液的DE值为80,加入0.04%(NH4)2SO4;发酵36h小时开始分四次流加补料液,流加的间隙时间为1.5小时。采用该工艺柠檬酸产率达到19.0%,转化率为99.2%,残糖为0.2%,周期为65小时,
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