水稻OsRDR6基因在病毒诱导的基因沉默中的功能研究

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依赖于RNA的RNA聚合酶(RNA-dependent RNA polymerase,RDR)基因家族广泛存在于酵母,真菌,线虫,植物等物种中,它是基因沉默通路中的重要成员,参与多种siRNA的产生。拟南芥中已有三个RDR基因被深入研究,其中AtRDR6基因参与ta-siRNA,nat-siRNA的产生,它还介导正义链转基因引起的沉默,它的突变体表现出由幼年期向成年期转换提前的表型。Rdr6突变体对CMV病毒的侵染表现出更敏感,但对TMV,TRV,TuMV,TVCV侵染不敏感。水稻基因组中编码五个RDR基因,其中Os01g34350基因与拟南芥的AtRDR6基因非常相似,被命名为OsRDR6基因。已有报道显示该基因的突变体shl2表现出顶端分生组织缺失的异常表型。我们从水稻中花11品种中克隆到了OsRDR6基因的全长ORF序列,将其转化到拟南芥rdr6-11突变体中,观察OsRDR6基因是否能互补AtRDR6的功能。结果显示,OsRDR6基因能恢复rdr6-11的异常发育表型,参与拟南芥中ta-siRNA的产生,并下调其靶基因AtARF3和AtARF4。OsRDR6基因还能参与CMV viRNA的产生。我们将OsRDR6的反义序列转化水稻中花11,得到了特异性降低了OsRDR6基因表达水平的转基因水稻。结果发现,转基因水稻中OsRDR6基因表达的降低并没有影响水稻TAS3siRNA的产生,转基因水稻对RSV和RDV都表现出更加敏感,病症相比野生型更严重,同时也积累了更多的病毒基因组RNA。RDV viRNA的积累量在OsRDR6表达降低的转基因水稻中少于野生型水稻中的积累量,说明OsRDR6基因也能参与viRNA的产生。我们的研究结果表明OsRDR6基因的功能与AtRDR6基因功能非常类似,都能参与ta-siRNA的产生,介导植物发育的调节,但是OsRDR6基因对病毒的抗性相比AtRDR6更加广范,它的表达量降低使水稻对双链RNA病毒和负链RNA病毒都更加敏感。
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