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目的:临床分离的鲍曼不动杆菌对抗菌药物的耐药性越来越严重,呈多重耐药、泛耐药、甚至全耐药的特点,而耐碳青霉烯鲍曼不动杆菌引起的感染,更是给临床抗感染治疗带来了麻烦与困难。调查分析天津市红桥医院临床分离的耐碳青霉烯鲍曼不动杆菌分布特点、耐药性及产碳青霉烯酶情况;探讨耐碳青霉烯鲍曼不动杆菌与碳青霉烯酶、整合子、插入序列共同区、复杂性整合子、外排泵过度表达、膜孔蛋白丢失等耐药机制之间的关系;为临床提供合理抗菌药物治疗策略,避免或减少院内耐药菌株的传播与流行。方法:收集2014年1月至2017年8月天津市红桥医院临床感染患者分离的非重复对亚胺培南和美罗培南同时耐药的鲍曼不动杆菌47株;药敏数据结果利用WHONET-5.6软件统计处理;碳青霉烯酶采用改良Hodge试验、EDTA协同试验、CIM抑制试验筛选;PCR仪器扩增碳青霉烯酶A类blaKPC基因,B类金属酶blaIMP-1、blaVIM-2、blaNDM-1基因,D类blaOXA-23-like、blaOXA-24-like、blaOXA-51-like、blaOXA-58-like基因,以及blaOXA-23-like和blaOXA-51-like基因上游插入序列ISAbal;PCR扩增整合酶基因Int1和Int2,并对整合酶阳性检测菌株,扩增其整合子可变区耐药基因,对可变区扩增阳性菌株PCR产物测序,分析携带的耐药基因盒;PCR扩增ISCR1基因,并对阳性菌株进一步扩增其可变区,测序分析可变区携带的耐药基因盒;对I类整合子和ISCRl基因同时检测阳性的菌株,进行I类整合子靠近3′-保守区的基因和ISCRl靠近5′-保守区的基因间的序列PCR检测,并测序分析耐药基因盒;PCR扩增adeABC外排泵系统基因adeA、adeB、adeC、adeS、adeR及膜蛋白基因carO;利用SPSS17.0软件对整合子及ISCR1阳性菌株与阴性菌株进行同组内部分抗菌药物耐药率间的χ~2检验,P<0.05时,差异有统计学意义;对CRAB和CSAB菌株外排泵基因adeA、adeB、adeC、adeS、adeR携带率进行同组内的χ~2检验,P<0.05时,差异有统计学意义。结果:临床分离的47株耐碳青霉烯鲍曼不动杆菌标本来源主要以呼吸道痰液为主,科室分布以ICU为主,其次是呼吸内科;对所测试的21种常见抗菌药物耐药现象非常严重,其中对阿米卡星耐药率最低为46.8%,其次是左氧氟沙星、妥布霉素、庆大霉素、复方新诺明、哌拉西林/他唑巴坦,分别为63.8%、70.2%、72.3%、72.3%、97.9%,对其余抗菌药物均为100%耐药;改良Hodge试验筛选碳青霉烯酶阳性为8株、CIM抑制试验阳性为1株、EDTA协同试验结果均为阴性;PCR结果显示,A类与B类碳青霉烯酶基因均未检测出,D类blaOXA-23-like和blaOXA-51-like基因,所有菌株均携带,阳性菌株检出率均为100%;46株CRAB菌株blaOXA-23-like基因上游检测到插入序列ISAba1,blaOXA-51-like基因上游均未检测出插入序列ISAbal;I类整合酶阳性菌株21株,检出率为44.7%(21/47),整合子可变区阳性菌株14株,发现两种整合子可变区,分别约为2000bp(13株)和3000bp(1株),产物经测序后比对证实,2000bp可变区携带耐药基因盒为aacA4,3000bp可变区携带耐药基因盒为aacC1;ISCR1阳性菌株19株,可变区阳性7株,均为同一种可变区,约为2000bp,产物经测序比对证实,携带转座酶基因tnpA;Int1与ISCR1同时阳性菌株4株,均扩增出复杂性整合子可变区,约为2000bp,与目的基因2027bp相符,经测序比对证实,携带blaIMP-18、aadA1b、blaOXA-2、qacED1耐药基因盒;所有菌株中,Int2均未检测到;I类整合子阳性菌株对庆大霉素、妥布霉素及复方新诺明的耐药率明显高于阴性菌株的耐药率,P<0.05,差异有统计学意义;ISCR1阳性菌株对左氧氟沙星、庆大霉素、妥布霉素及复方新诺明的耐药率明显高于阴性菌株,P<0.05,差异有统计学意义;PCR结果显示外排泵基因adeA、adeB、adeC、adeS和adeR检测结果阳性菌株分别为44株、44株、43株、44株和44株;15株敏感菌株携带外排泵基因adeA、adeB、adeC、adeS和adeR分别为8株、3株、6株、8株和8株,CRAB外排泵基因携带率明显高于CSAB外排泵基因携带率,P<0.05,差异有统计学意义;PCR结果显示47株CRAB膜孔蛋白基因carO的携带率为91.5%(43/47),仅4株未扩增出carO基因。结论:ICU和呼吸内科是我院CRAB引起严重感染疾病的重点监测科室;CRAB对21种常见抗菌药物耐药性非常严重,仅对阿米卡星保持相对较高敏感性;改良Hodge试验、EDTA协同试验、CIM抑制试验检测鲍曼不动杆菌产碳青霉烯酶时,方法操作简单,改良Hodge试验方法的敏感性与特异性不确定,EDTA协同试验、CIM抑制试验方法的敏感性与特异性均较高,但结果仍需要PCR扩增进一步证实耐药基因是否存在;我院CRAB耐药机制以产生D类blaOXA-23与blaOXA-51型碳青霉烯酶为主,ISAbal与blaOXA-23基因关系密切,可作为启动子,调控blaOXA-23基因的高表达,从而增强其对碳青霉烯酶类和其他抗菌药物的耐药性;I类整合子主要介导对氨基糖苷类药物耐药;ISCR1介导对多种抗菌药物耐药;I类整合子和ISCR1可以以串联形式存在,形成复杂性整合子,主要介导对β-内酰胺酶类、氨基糖苷类及季铵盐类化合物耐药;外排泵adeABC基因在鲍曼不动杆菌中普遍存在,但在CRAB菌株中携带率非常高,在细菌耐药中起重要作用;膜孔蛋白缺失或表达下调并非本院CRAB耐药机制中的主要耐药机制。