论文部分内容阅读
【目的】:将带有绿色荧光蛋白（green fluorescent protein,GFP）标记的兔骨髓间充质干细胞（mesenchymal stem cells,MSC）,通过静脉移植患有多器官功能不全综合征（multiple organ dysfunction syndrome,MODS）模型兔,观察MSC移植对MODS模型兔各个器官功能的影响及移植后的分布情况,为MODS的治疗提供新的思路。【方法】:无菌条件下取兔的骨髓,体外分离、扩增MSC,慢病毒转GFP标记。将30只兔子随机分为三组:正常组、模型组（失血性休克合并内毒素休克制作兔多器官功能不全综合征模型）、模型治疗组（模型组+GFP标记的MSC移植）,每组10只;将模型组、模型治疗组人为地进行失血性休克合并内毒素休克制作兔多器官功能不全综合征模型。在模型成功制作24h后,将体外分离、扩增、标记的MSC按照3×106cells/kg耳缘静脉注射,分别于第1天、第7天、第14天、第28天抽血检测模型组、模型治疗组PaO2、PaCO2、BUN、ALT、CK-MB的变化;模型组、模型治疗组第28天处死后取肾、肺、肝、脑、心脏组织制作病理切片;并将肾、肺、肝、脑、心脏组织匀浆提取DNA后通过PCR技术检测MSC在各个器官的分布情况。【结果】:获得的细胞能够贴壁成长,具有分化为成骨和成脂肪细胞的能力,通过慢病毒载体转入GFP基因后仍具有分化能力,表面抗体表达CD34-,CD45-,CD73+,CD105+,符合MSC的特性。动物模型建立后,多器官功能不全综合征兔的PaO2、PaCO2、BUN、ALT、CKMB与正常组比较,有显著差异,与临床病症类似。与模型组比较,模型治疗组PaO2在第7天检测发现有所上升,肺功能有所改善;模型治疗组BUN在第7天检测发现有所下降,肾功能有所改善;模型治疗组ALT在第14天检测发现有所下降,肝功能有所改善,其他比较均无差异。死亡率也无差异。组织病理切片发现模型治疗组的肺、肾、肝、脑、心均见转有GFP标记的细胞;通过PCR技术也发现上述组织均含有GFP基因,且在肺组织分布为最多,其次为肝、肾、脑、心。【结论】:（1）建立了GFP标记的MSC的体外分离、培养、定向分化及鉴定的技术平台。（2）成功建立了兔MODS模型。（3）静脉注射移植的MSC可通过血液系统分布到肺、肾、肝、脑、心脏等组织器官,且在肺组织分布为最多,其次为肝、肾、脑、心。接受MSC移植的MODS模型兔PaO2在第7天检测发现有所上升,肺功能有所改善;BUN在第7天检测发现有所下降,肾功能有所改善;ALT在第14天检测发现有所下降,肝功能有所改善。治疗机理可能为抑制过强免疫炎症反应,调整系统平衡;产生细胞因子,调节网络平衡;参与损伤修复。有待进一步研究。