本实验以太湖猪为研究对象,采用组织块法培养成纤维细胞系,胶原蛋白酶消化法培养前脂肪细胞系,并对所建细胞系进行了鉴定,包括细胞形态观察、冻存前和复苏后接种的存活率测定、生长曲线绘制、染色体核型分析等一系列的生物学特性分析。此外,采用50nmol/L胰岛素、100 nmol/L地塞米松、100 nmol/L罗格列酮和0.25 mmol/L 1-甲基-3-异丁基黄嘌呤分化诱导已建立的前脂肪细胞,观察其形态学变化,用油红O染色法进行定性检测,并通过测定OD值确定诱导过程中细胞甘油三酯的变化情况。得到结果如下:1.成纤维细胞呈梭形或不规则三角形,细胞先沿组织块周围生长,随后向外伸展形成生长晕,传代细胞与原代细胞在形态上无明显差异。前脂肪细胞接种3～6h后开始贴壁,为典型的成纤维细胞样。2.成纤维细胞冻存前和复苏后接种的存活率分别为96.5%和93.2%,前脂肪细胞分别为95.4%和92.3%。3.成纤维细胞和前脂肪细胞的群体倍增时间均为72h,在体外的生长增殖趋势呈“S”型,经历了潜伏期、指数增生期和停滞期三个阶段,符合细胞在体外生长的一般规律。4.对成纤维细胞和前脂肪细胞进行染色体分析得出:2n=38,XY,为稳定的二倍体细胞系,不存在种间的交叉污染。5.诱导分化过程中,第3d即可观察到小脂滴,第4d有多个小脂滴,随着分化进行大多数胞浆中的小脂滴聚集成葡萄串状,细胞变成椭圆形或者圆形。大部分前脂肪细胞在第9～10d均成功的分化成为成熟的脂肪细胞,用油红O染色呈红色。6.细胞内脂肪含量测定与分化过程中细胞形态变化情况吻合。综上所述,以上各项指标都符合细胞建系的要求,成功的构建出了太湖猪的成纤维细胞系和前脂肪细胞系,并诱导分化出成熟的脂肪细胞。