过去20年中，消化性溃疡病的研究取得了重大进展，绝大多数消化性溃疡病患者已得到了治愈。幽门螺杆菌(Helicobacter pylori，Hp)感染及服用非甾体抗炎药(nonsteroidal anti-inflammatory drugs，NSAIDs)被认为是消化性溃疡病的两个重要因素。现在诸多研究显示，虽然Hp感染是消化性溃疡产生的主要原因，但Hp感染率不能解释所有消化性溃疡发病的地区差异。而且，单纯Hp感染或服用NSAIDs都不可能必然形成溃疡。因此目前溃疡病的发病机制尚不清楚。对溃疡病的分布、周期性发作和复发的过程均不能作出圆满的解释，可能有遗传和/或环境因素作用的结果。一些国家的研究还发现无病因可查的复发性溃疡病人的比例较高，在美国约为20％，澳大利亚的悉尼市约22％。这些研究结果都提示消化性溃疡形成的病因中还有其它因素在起作用。 自1982年人们在乳腺癌细胞系中首次发现pS2之后，又陆续发现解痉多肽(spasmolytic polypeptide，SP)和肠三叶因子(intestinal trefoil factor，ITF)。这三种小分子蛋白质都具有独特的三叶草型二级结构。而且编码基因依次排列于染色体21q.22.3上，故将它们归类为三叶因子家族(Trefoil factor family,TFF)。pS2，SP和ITF也分别被重新命名为TFF1，TFF2，TFF3。TFFs一般由哺乳动物胃 浙江大学硕士学位论文肠道及两栖动物皮肤上劲液细胞分泌，它们对热和消化酶有很高的稳定性。近几年研究提示，TFFs表达的部位和含量与消化性溃疡病和炎症性肠病的关系密切。动物实验和体外实验都证明，缢膜损伤后TFFs能促进胃肠道上皮细胞移行和修复。另外，TFFS与鄙蛋白混合后可增加剩液的粘性，抑制H“的渗透，参与胃十二指肠瓤液一碳酸氢盐屏障。因此有理由相信它们对消化道上皮损伤修复过程起着重要的作用，可能是一种潜在的胃劲膜保护因子。 TFFZ在生理条件下主要分布在人胃窦和十二指肠瓢膜中。作为TFFs中唯—一个具有2个三叶草型结构域p一结构域）和糖基化的小分子蛋白质，又集中分布在消化性溃疡好发的胃窦和十二指肠，因此推测其分布和含量的差异可能会与消化性溃疡病的易感性有关。 由于幽门螺杆菌＊P）各种致病因子对胃缢膜的共同作用，从而造成胃鄙膜的损伤，甚至导致胃溃疡的形成。HP也可能通过对各种胃肠激素的影响引起病理生理改变。所以HP对TFFZ表达的影响也是我们研究的课题之一。 本实验采用原位杂交技术，用标记过的反义人TFFZ信使核糖核酸（mRNA）探针检测胃溃疡内侧缘和周边剩膜中 hTFFZ InRNA的表达，并与慢性浅表性胃炎轴膜中hTFFZ mRNA表达情况相比较，以期了解TFFZ在胃肠道中表达的意义，同时研究不同病情下Hp感染对TFFZmRNA表达的影响来进一步探讨其在胃溃疡发病机制中的作用。 我们收集浙江大学医学院附属第二医院胃镜标本，其中胃溃疡边缘、溃疡远处scm外组织标本各32例和慢性浅表性胃炎标本36例作为对照组。标本离体后立即用4％多聚甲醛固定，石蜡包埋。HE染色获得病理诊断。 利用原位杂交方法分别对不同组织中 TFFZ tnRNA进行定位和半定量测定。取手术切除的正常胃锚膜组织，液氮保存。用TRJZ。l提取胃劲膜总NA，在下游引物引导下逆转录成 TFFZcDNA。用上游引物（序列：SGAA TCA CCA GTGACC AGT GT3’）和下游引物（序列：5’GTA ATG GCA GTC TTC CAC AG3’）通过聚合酶链反应印olmperase cain eachon，PCR）技术合成TFFZCDNA中一段 25fop的核昔酸片段。将该 cDNA片段与载体 pGEM－Teasy连接合成重组质 2 浙江大学硕士学位论文粒．cDNA，再转化感受态细菌，扩增，纯化。质粒－cDNA线形化。以沙门氏菌噬菌体SP6和大肠杆菌噬菌体T7为启动子，用地高辛体外转录法标记W探针。行原位杂交检测TFFZInRNA在组织中的表达。反义mRNA用于探测靶InRNA，正义mRNA和不加探针的杂交液作阴性对照，标记的6－ActinRNA作阳性对照。显色剂采用四哩氮蓝／5－M－4氯－3NI跺－磷酸盐（NBTNCD），阳性信号为蓝紫色颗粒。 综合染色反应强度及阳性细胞数量两个方面进行半定量，采用SAS软件，以Wilcoxon检验和配对秩和检验进行统计学处理。 结果显示，TFFZInRNA主要分布于胃小凹基底部的柱状细胞，幽门腺腺泡及导管细胞中。所有胃新膜标本上ThFZ mRNA表达都呈阳性。在 32例胃溃疡内侧缘标本中“＋” 22例，“＋＋” 9例，“＋＋＋” l例。相应距胃溃疡内侧缘 scm外的胃猫膜标本阳性32例，其中“＋” 25例，“＋＋” 6例，“＋＋＋” l例。36例浅表性胃炎标本中“＋” 19例，“＋＋” 11例，“＋＋＋” 6例＊ TFFZmRNA 在浅表性胃炎组的表达高于胃溃疡内侧缘组，在胃溃疡内侧缘表达要高于溃疡scm外的胃劲膜，但组间表达差异无显著性（P＞0刀5和P＞0刀5），而浅表性胃炎