凝溶胶蛋白在乳腺癌MCF-7细胞系中的作用及其机制

来源 :锦州医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:bxinliy
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目的本研究通过免疫组化方法分析凝溶胶蛋白(gelsolin,GSN)在乳腺浸润性导管癌早期伴淋巴结转移患者及无淋巴结转移患者癌组织中的表达情况,初步探讨其对乳腺癌MCF-7细胞增殖及侵袭的影响,同时对相应的分子机制进行分析。方法选取收集2018年1月至2018年12月锦州医科大学附属三院以及锦州医科大学附属一院经过诊断后确定为乳腺浸润性导管癌的女性患者共40例,进而获取其癌组织标本,此次实验中共收集T1N1-3期20例、T2-3N0期20例,同时收集20例乳腺纤维腺瘤患者瘤旁正常组织标本作为对照,在对GSN表达进行检测时采用免疫组化法。按研究需要完成GSN过表达载体的构建,完成后实现向乳腺癌MCF-7细胞的转染,通过RT-q PCR检测转染效率,并Western blot验证。分别采用CCK8法和Transwell试验检测转染细胞增殖和侵袭情况。为明确其影响机制,Western blot法检测GSN过表达对乳腺癌MCF-7细胞中PI3K-AKT信号通路的影响。结果1、与乳腺纤维腺瘤旁正常组织相比,GSN在T1N1-3期和T2-3N0期乳腺癌组织中均呈低水平表达,明显低于乳腺纤维腺瘤旁正常组织,且与乳腺癌T2-3N0组织比较,T1N1-3期乳腺癌组织中GSN含量最低(P<0.05)。2、RT-qPCR和Western blot检测显示,与正常对照和空载体组相比,过表达载体GSN-pc DNA3.1转染MCF-7细胞后,GSN过表达显著上调了GSN的m RNA和蛋白的相对表达水平(P<0.05)。3、CCK8检测所获结果表明,与正常对照组相比,向MCF-7细胞转染GSN过表达载体后,MCF-7细胞受到影响,具体表现为其增殖受到显著抑制(P<0.05)。4、Transwell试验结果显示,与正常对照和空载体组相比,向MCF-7细胞转染GSN过表达载体后,MCF-7细胞受到影响,具体表现为其侵袭受到显著抑制(P<0.05)。5、Western blot结果显示,与正常对照组相比,GSN过表达背景下,检测后可以发现PI3K-AKT信号通路中表达下调的PI3K和p-AKT蛋白(P<0.05)。结论1、GSN可能与乳腺浸润性导管癌的淋巴结转移相关。2、GSN可能对MCF-7细胞中PI3K和p-AKT蛋白表达进行抑制,从而阻止乳腺浸润性导管癌癌细胞的增殖和侵袭。
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