【摘 要】
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目的缺血性脑卒中发病突然,治疗时间窗短,预后差,给家庭及社会带来巨大负担。线粒体是三磷酸腺苷（adenosine triphosphate,ATP）来源的主要细胞器,在缺血性脑卒中的发展过程中有着不可替代的重要作用,而线粒体DNA（mitochondrial DNA,mtDNA）拷贝数是反应线粒体生物合成的重要标志物之一。因此我们猜想mtDNA拷贝数与缺血性脑卒中之间可能存在某些联系。本研究主要探
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目的缺血性脑卒中发病突然,治疗时间窗短,预后差,给家庭及社会带来巨大负担。线粒体是三磷酸腺苷（adenosine triphosphate,ATP）来源的主要细胞器,在缺血性脑卒中的发展过程中有着不可替代的重要作用,而线粒体DNA（mitochondrial DNA,mtDNA）拷贝数是反应线粒体生物合成的重要标志物之一。因此我们猜想mtDNA拷贝数与缺血性脑卒中之间可能存在某些联系。本研究主要探讨缺血性脑卒中mtDNA拷贝数与线粒体功能的变化,或许能为临床评估、治疗缺血性脑卒中提供新的思路。方法1.从临床、动物及细胞三个层面进行研究:（1）临床分组:（1）正常对照组12例;（2）缺血性脑卒中组12例。（2）动物分组:（1）正常对照组大鼠5只;（2）大脑中动脉栓塞（Middle cerebral artery occlusion,MCAO）组大鼠6h和24h各5只。（3）细胞分组:（1）常氧处理组;（2）低氧处理组。2.分别获取缺血性脑卒中患者新鲜外周静脉血、大鼠的下腔静脉血及大脑组织,购买大鼠皮层神经元细胞（RN-c）和小鼠海马神经元细胞（HT-22）,通过实时荧光定量PCR（qPCR）技术检测mtDNA拷贝数、流式细胞术检测线粒体膜电位（Mitochondrial membrane potential,MMP）水平、活性氧（Reactiveoxygenspecies,ROS）与线粒体膜通透性转换孔（mitochondrial permeability transition pore,mPTP）。结果1.缺血性脑卒中组外周静脉血白细胞mtDNA拷贝数明显升高,线粒体膜电位水平与mPTP开放未见明显变化,ROS升高;2.MCAO组大鼠下腔静脉血白细胞mtDNA拷贝数较正常对照组降低（F=244.3,P<0.0001）,MCAO-6h组mtDNA拷贝数出现了明显的减低,MCAO-24h组mtDNA拷贝数较MCAO-6h稍有增加。MCAO组大鼠脑组织mtDNA拷贝数与正常对照组相比出现减低（F=8.043,P=0.0201）,MCAO-6h组大鼠mtDNA拷贝数下降明显,MCAO-24h组mtDNA拷贝数较MCAO-6h组明显增加。MCAO组大鼠脑组织神经元细胞线粒体膜电位水平未见明显改变,MCAO-6h组mPTP开放未见明显变化,MCAO-24h组升高且高于正常对照组（F=23.74,P<0.0001）,MCAO-24h组ROS较正常对照组减低（F=5.564,P=0.0195）;3.低氧处理组RN-c的mtDNA拷贝数和线粒体膜电位水平均明显减低,与常氧处理组相比,差异有统计学意义,mPTP开放无明显改变,ROS升高;低氧处理组HT-22的mtDNA拷贝数、线粒体膜电位水平、mPTP开放均显著增加,ROS降低。结论缺血性脑卒中发生早期机体主要依赖于线粒体数量增加及线粒体功能的恢复维持大脑生理功能,这一过程可能存在短暂的内源性代偿修复机制。
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