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原发性肝细胞癌（hepatocellular carcinoma，HCC）是常见的恶性肿瘤，在全球恶性肿瘤死亡率中居第三位，每年引起数十万人死亡。我国是肝细胞癌高发区，发病率已上升到恶性肿瘤的第二位，年死亡率位于恶性肿瘤死亡率的第2～3位，近年来其发病率有增高的趋势。肝细胞癌现已成为严重危害人民生命安全的恶性肿瘤之一。目前肝癌的治疗主要有手术切除、化疗、放疗等。由于病人就诊时已多属晚期，上述治疗方法虽已取得很大的进展，但晚期肝癌病人的预后仍然极差。因此，阐明肿瘤的发生机制对于从源头上防止肿瘤的发生，进而最终战胜肿瘤是非常重要的，为此，全球的科学家正在进行不懈的努力。
Notch基因发现于1919年，编码一个由2753个氨基酸组成的跨膜受体。近年来，从哺乳类动物中克隆了一系列Notch受体的同源分子包括Notch1～4和5种配体，分别是DLL1、DLL3、DLL4、Jagged1和Jagged2。当Notch受体与配体结合后，受体释放其胞内域NICD（Notch Intracellular Domain），NICD转运到核内后，诱导靶基因的转录。Notch信号通路不但与细胞的增殖、分化密切相关，与肿瘤的发生发展都有密切的联系。1991年，Notch在人类T淋巴母细胞白血病中被鉴定出来，提示其与肿瘤相关，随后的研究发现，染色体易位t（7；9）（q34；q34.3）导致位于9号染色体上的Notchl基因断裂，Notch胞外区丢失，其胞内区获得组成性活性而具有致痛作用。但是，Notch在肿瘤发生发展的过程中，究竟是扮演癌基因还是抑癌基因角色？它在肿瘤发生的那个（些）环节起作用？目前均仍无定论。β—catenin在Wnt通路起核心分子作用，对肿瘤形成、分化、浸润及转移起重要作用。目前认为，Notch和Wnt信号通路是相互联系并协调平衡的，它们之间存在着串话（cross—talking）。因此，本实验的目的是通过组织芯片技术，对大样本的肝癌标本进行Notch1，Jagged1和β—catenin的检测，观察并分析它们的表达差异，探讨Notch1信号通路在肝癌中的作用，探讨肝癌的发生机制。
实验目的：
应用组织芯片技术，收集大样本的肝细胞癌，通过免疫组化方法检测Notch1/Jagged1和β—catenin的表达情况，初步探讨Notch1/Jagged1在肝细胞癌中的作用。同时对其阳性表达与肝细胞癌的临床病理特征进行分析，以期发现更多的信息。此外，我们收集新鲜肝细胞癌及癌旁组织手术标本和培养肝细胞癌株HepG2和肝正常细胞株LO2，运用免疫组化和RT—PCR的方法，进一步检测Notch1/Jagged1和β—catenin mRNA的表达，同时通过研究β—catenin表达与Notch1/Jagged1表达的相关性，初步探讨肝细胞癌中Notch1信号通路和Wnt信号通路之间的联系，旨在为进一步阐明肝癌的发生机制提供相关的理论依据。
材料与方法：
共收集711例手术切除病例的石蜡包埋标本，其中包括339例肝细胞癌、22例肝胆管细胞癌、82例转移性癌、174例癌旁肝组织、94例正常肝组织。运用组织芯片技术将上述标本制作成13个组织芯片蜡块，通过免疫组织化学技术检测Notch1/Jagged1和β—catenin抗体在各种病例的表达情况，分析抗体的阳性表达与肝细胞癌的临床病理特征之间的联系。同时提取37例新鲜肝细胞癌、37例癌旁肝组织和肝细胞癌株HepG2、肝正常细胞株LO2的RNA进行RT—PCR，进一步检测Notch1/Jagged1和β—catenin mRNA的表达。
结果和结论：
（1） Notch1/Jagged1在肝细胞癌中低表达，在非肿瘤组织中高表达。Notch1/Jagged1表达水平显著性正相关。提示Notch1/Jagged1在肝细胞癌中可能相互作用，起着抑癌作用。
（2） Notch1在肝细胞癌中的表达与年龄、血清AFP浓度、肿瘤细胞分化程度显著相关；Jagged1的表达与肿瘤细胞分化程度显著相关。肝细胞癌中Notch1/Jagged1在分化好的细胞高表达，分化差的细胞低表达；提示Notch1/Jagged1信号通路可能对肿瘤细胞的分化起着重要的调控作用。
（3）Notch1/Jagged1的表达与门静脉癌栓形成显著相关，提示Notch1/Jagged1与肝癌肝内播散有关。
（4）β—catenin的胞质/核表达在肝细胞癌中高表达，在非肿瘤组织中低表达；β—catenin的胞质/核表达在分化好的细胞表达低，分化差的细胞表达高。提示β—catenin在肝细胞癌的发生发展过程中起着促癌的作用。
（5） Notch1与β—catenin的表达水平存在显著性负相关，提示它们在肝细胞癌中相互拮抗，互为对方的调控者。
（6）半定量RT—PCR结果显示肝细胞癌中Notch1/Jagged1表达低，β—catenin表达高，与它们的蛋白表达情况同步，提示Notch1/Jagged1在肝细胞癌中的表达下降，可能不是发生转录水平，而是由其它原因引起。