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实验目的：1.采用三维细胞培养技术，构建胰腺癌细胞株SW1990和胃癌细胞株SGC-7901的体外模型。2.探讨消化系统肿瘤中形成血管生成拟态（Vasculogenic mimicry, VM）的能力。实验方法：在体外分别建立胰腺癌细胞株SW1990与胃癌细胞株SGC-7901的三维培养肿瘤模型，具体方法如下：在二维平面培养系统，即传统的细胞培养模式，将胰腺癌细胞株SW1990和胃癌细胞株SGC-7901分别接种于含有90%RPMI1640培养基+10%胎牛血清+抗生素（100u/ml青霉素、100μg/ml链霉素）的完全培养基中，在细胞培养瓶中进行细胞培养。再将培养瓶移入37℃、5%CO2饱和湿度孵化箱中培养。每隔24h或48h内更换完全培养液(90%RPMI1640培养基+10%胎牛血清+抗生素)。待细胞融合度达到70％-80％时，行传代培养。在三维培养系统中，首先将96孔板置于冰上，在冰上，将Matrigel胶分别与1×103个处于对数生长期的胃癌细胞株SGC-7901和胰腺癌细胞株SW1990的培养基悬液（将细胞分别与预冷的无血清RPMI1640培养基按1:1的比例混合）等体积混合制成细胞悬液，分别取70μl接种于96孔板，然后迅速放入37℃孵化箱中孵育2min，待混合液胶化，向每孔加入并覆盖完全培养液100μl，置于37℃、5%CO2饱和湿度条件下的孵化箱中培养。每隔24h更换96孔板中的完全培养液（90%RPMI1640培养基+10%胎牛血清+抗生素）继续培养。分别在24h、48h、72h、96h于倒置显微镜下，随机取视野观察并拍照记录细胞的生长状态及血管生长拟态（VM）形成情况。实验结果：1.上皮样中分化胃腺癌细胞株SGC-7901在二维细胞培养中，2-4h后贴壁生长，接种后24-72h传代一次，当细胞融合度达到90%时，进行实验。在Matrigel基质胶中，接种后胃癌细胞株SGC-7901悬浮于水凝胶中，呈圆形，24-48h可见细胞大量增殖，可见大量不完整的管腔形成，72-96h可见完整的网络样VM形成。上皮样中分化胃腺癌细胞株SGC-7901在三维细胞培养所形成的模型中，在倒置显微镜的观察下，可见网络样VM开始形成。2.二维细胞培养中，胰腺癌细胞株SW1900在接种后4-8h后贴壁生长，细胞呈梭形或多角形，72-96h传代一次，细胞融合度达到90%时，进行实验。在Matrigel基质胶中，胰腺癌细胞株SW1990接种后悬浮于水凝胶中，呈圆形，24-48h后可见细胞分裂、生长，未观察到VM形成，72-96h依然散在生长，且生长速度减慢，仍未观察到VM的形成。胰腺癌细胞株SW1900体外三维细胞培养于倒置显微镜下，24-48h并未观察到聚团生长现象，延后72-96h依然未观察到聚团生长的现象。胰腺癌细胞株SW1990的三维细胞培养未观察到形成VM。结论：1.不同消化系统肿瘤中VM的表达存在差异。2. VM在胃癌的发生、发展、浸润及转移等恶性行为中可能发挥作用。3.VM与胰腺癌的发生、发展、浸润、转移等生物学行为，可能无明显相关。