【摘 要】
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目的:研究经过氧化氢(H2O2)损伤干预下Rab30在PC12细胞中的表达情况,初步探讨Rab30在PC12细胞中的信号通路。方法:1、PC12细胞购自中国科学院上海细胞生物研究所,用完全培养
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目的:研究经过氧化氢(H2O2)损伤干预下Rab30在PC12细胞中的表达情况,初步探讨Rab30在PC12细胞中的信号通路。方法:1、PC12细胞购自中国科学院上海细胞生物研究所,用完全培养基(含10%的胎牛血清、90%的1640培养液、100 U/ml青-链霉素溶液),调节p H值至为7.2~7.4,于37℃、5%CO2饱和湿度培养箱中培养,待细胞生长汇合率达80%左右,用胰蛋白酶消化、传代,选取对数生长期的细胞进行研究;2、实验分为:正常组和H2O2组两组;3、四甲基偶氮唑盐(MTT)法测定各细胞存活率变化;4、Annexin V-FITC/PI双染法检测各组细胞的凋亡率;5、Western-blot法检测Rab30、JNK3、GM130、Caspase-3的蛋白表达情况。结果:1、PC12细胞在显微镜下呈多角型细胞,贴壁不稳,易成团,周围有晕光,折光度强,成簇生长,培养5~7天后可形成密集的细胞簇,布满整个培养瓶。2、用四甲基偶氮唑盐(MTT)酶反应检测法检测PC12细胞存活率,发现经H2O2损伤干预后的吸光度A值(0.1577±0.0100)与正常组(0.2553±0.0084)比较减少,差异有统计学意义(P<0.05);3、用Annexin V-FITC/PI法检测细胞凋亡率,发现经H2O2损伤干预后细胞的凋亡率明显增加,即H2O2组(32.7500±1.0485,46.1167±1.1501)的早期凋亡率和总凋亡率均较正常组(0.5033±0.0216,0.6333±0.0450)显著增加,差异有统计学意义(均P<0.05)。4、Western-blot法检测各蛋白相对表达量,发现经H2O2损伤干预后中的JNK3、Caspase-3在PC12细胞中表达较正常组显著增加,Rab30、GM130较正常组表达下降。Rab30在H2O2组(0.0570±0.0014)中的蛋白表达与正常组(0.2272±0.0020)比较,P<0.05,有统计学意义;JNK3在H2O2组(0.6904±0.0211)中蛋白表达与正常组(0.1167±0.0024)比较,P<0.05,有统计学意义;GM130在H2O2组(0.0821±0.0038)、与正常组(0.2704±0.0053)比较,差异有统计学意义(P<0.05);Caspase-3在H2O2组(0.8620±0.0198)与正常组(0.3232±0.0006)比较,差别有统计学意义(P<0.05)。结论:1、H2O2可诱导PC12细胞损伤和凋亡;2、H2O2干预下Rab30在PC12细胞中的表达下调;3、H2O2可能通过激活JNK3的表达而下调Rab30、GM130的表达,使高尔基体结构破碎成片,并可通过调控Caspase-3的表达,诱导PC12细胞的凋亡和死亡。
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