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目的手术与放化疗是当前中晚期食管鳞癌患者的重要治疗手段,人们一直在探索更好的疗效。目前免疫治疗已成为肿瘤治疗的新途径,PD-1（Programmed cell death-1,程序性死亡受体1）以及它的配体PD-L1（Programmed cell death-ligand1,程序性死亡配体1）与肿瘤的发生发展密切相关,其共同组成的PD-1/PD-L1信号通路,能够抑制细胞增殖并抑制生长因子的生成。与此同时,它们对T细胞的活化及调控免疫应答也起到至关重要的作用。免疫检查点抑制剂是目前肿瘤中一种很有成效的治疗方法;然而,一线免疫治疗疗效并没有达到最初的期望,在肺癌、食管癌的研究中显示,单药在PD-L1高表达的患者中有效,也可能无效,对于PD-L1低表达或不表达的患者疗效不明显,但化疗联合免疫治疗后疗效显著增加。寻求新的生物标记物预测食管鳞癌患者预后,并为治疗提供指导一直以来是临床研究的热点。在多种实体瘤中,肿瘤浸润性CD8+细胞毒T细胞与患者的生存周期及预后密切相关,而指叉头框蛋白3（Forkhead box P3,FOXP3）调节性T细胞亦能发挥重要的抑制抗肿瘤作用。国内外已对食管鳞癌（Esophageal squamous cell carcinoma,ESCC）根治术后或镜检后取病理检测CD8+、FOXP3+浸润情况对预后的影响进行了实验分析,以及放、化疗后PD-L1表达情况进行了与预后和CD8+、FOXP3+浸润情况的相关性研究,但化疗前后PD-L1的表达差异及CD8+、FOXP3+浸润情况却少有报道。本研究目的是探究食管鳞癌新辅助化疗前后PD-L1表达变化情况及CD8+/FOXP3+比值及其与预后之间的关系。方法本实验收集泰州市人民医院2015年10月至2021年10月期间行食管癌切除术的ESCC（食管鳞癌）100例患者初步确诊时的内镜活检标本及术后标本。其中25例患者应用了新辅助化疗（紫杉醇类+铂类）化疗1-4个周期（平均2.4周期）的方案治疗,称为新辅助化疗组;75例患者在手术前均未给予放化疗以及免疫治疗,仅行食管癌根治术,称为单纯手术组。通过免疫组化的方式检测肿瘤细胞中PD-L1的表达评分以及CD8+、FOXP3+的计数阳性细胞。根据染色强度及阳性细胞率进行半定量分析,每张免疫组化切片随机选择5个具有代表性的高倍视野（X200倍）进行评估,无染色为0分,浅黄色为1分,棕黄色为2分,黄褐色为3分;观察PD-L1的阳性细胞面积率,上述两项积分相乘,计算出PD-L1的表达评分。若患者治疗后PD-L1的表达较治疗前增加,即为PD-L1上调组,反之为未上调组。随机选取间质、癌巢中5个具有代表性的高倍视野（×200）计数阳性细胞,求取CD8+/FOXP3+比值,然后计算CD8+/FOXP3+比值经过治疗后与治疗前的差值;统计分析PD-L1表达、CD8+/FOXP3+比值在食管鳞癌中与性别、年龄、吸烟、肿瘤部位、分化程度、分期、脉管癌栓、神经侵犯等临床因素之间的关系,比较肿瘤细胞PD-L1表达评分及CD8+/FOXP3+比值的变化,然后进行预后分析。结果所有患者中,PD-L1的表达水平在手术后的改变与性别、年龄、吸烟、肿瘤部位、分化程度、分期、脉管癌栓、神经侵犯等均不相关,而与新辅助化疗否相关（P＜0.001）。与单纯手术组相比,新辅助化疗组肿瘤细胞PD-L1的表达在手术后明显增高（32.0%vs 76.0%,P＜0.001）。所有患者中CD8+/FOXP3+在手术后比值变化情况与性别、年龄、吸烟、肿瘤部位、分化程度、分期等均不相关,但与新辅助化疗否（P=0.002）、脉管癌栓（P=0.024）、神经侵犯（P=0.024）显著相关,CD8+/FOXP3+比值降低者易有脉管癌栓（74.1%vs 52.4%,P=0.024）和神经侵犯（75.9%vs 54.8%,P=0.027）。与单纯手术组相比,新辅助化疗组肿瘤细胞CD8+/FOXP3+比值的变化在手术后的样本观察到更易增高（33.3%vs 68.0%,P=0.002）。在新辅助化疗组,与CD8+/FOXP3+未升高组患者相比,CD8+/FOXP3+比值升高组患者可获得更好的OS（P=0.037）及DFS（P=0.007）,相反地,与PD-L1上调组患者相比,PD-L1未上调组患者可获得更好的OS（P=0.014）及DFS（P=0.038）,且差异具有统计学意义。在单纯手术组,与CD8+/FOXP3+未升高组患者相比,CD8+/FOXP3+比值升高组患者可获得更好的OS（P=0.033）及DFS（P=0.003）,与PD-L1上调组患者相比,PD-L1未上调组患者可获得更好的OS（P=0.004）及DFS（P=0.001）,且差异具有统计学意义。多因素分析显示,新辅助化疗后肿瘤细胞PD-L1及CD8+/FOXP3+比值表达变化情况是OS的独立预后因素,即新辅助化疗后PD-L1表达未增加、CD8+/FOXP3+比值升高的患者生存期较好;新辅助化疗后PD-L1表达变化情况是DFS的独立预后因素,即新辅助化疗后PD-L1表达未增加的患者无病生存期较好。结论本研究显示,在食管鳞癌中,CD8+/FOXP3+比值在新辅助治疗后明显上升,化疗可诱导PD-L1的表达上升;同时,新辅助化疗后CD8+/FOXP3+比值未升高或PD-L1表达上调是独立的预后不良因素。本结果为ESCC免疫治疗分子标志物的临床应用提供了新的初步的证据。