目的：
　　肝癌干细胞通常被认为是引起肝癌复发转移的重要原因，而α2δ1被证明是肝癌干细胞的表面标志物之一，针对此标志物进行特异性治疗有望减少肝癌复发的可能性。因此本研究希望通过利用CRISPR/Cas9系统在Hep12肝癌细胞系中构建α2δ1基因的敲减细胞系，并观察α2δ1敲减对肝癌细胞干性的影响，为以后深入研究提供研究基础。
　　方法：
　　设计3对靶向α2δ1的sgRNA，长度为20bp，构建到lentiCRISPRv2-puro载体上，然后在体外检测sgRNA切割活性，利用慢病毒包装系统包装含有sgRNA的重组质粒，将包装好的病毒感染Hep12细胞，两天后加入嘌呤霉素筛选，通过Westernblot验证α2δ1的敲减效果和干性相关基因的表达，通过成球实验检测其体外自我更新能力的变化。
　　结果：
　　测序结果显示sgRNA成功插入载体质粒；体外切割实验显示三条sgRNA均有切割活性；Westernblot结果显示α2δ1基因的表达显著降低，干性相关基因BMI1和Nanog的表达显著被抑制；无血清培养基球体形成实验结果表明，敲减α2δ1导致Hep12细胞的体外自我更新能力减弱。
　　结论：
　　成功构建出敲减α2δ1的慢病毒表达质粒，并通过Cas9体外酶切实验证明设计的3条sgRNA具有切割活性；利用CRISPR/Cas9技术成功构建敲减α2δ1基因的Hep12肝癌细胞系，敲减α2δ1基因后能抑制Hep12细胞肿瘤干细胞样特性。