【摘 要】
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鸭肝炎病毒(Duck Hepatitis Virus, DHV)是一类小RNA病毒,能引起以肝炎为主要特征的雏鸭急性、高度致死性传染病。1周龄内雏鸭易感,死亡率高达95%,给我国养鸭业带来了较大的
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鸭肝炎病毒(Duck Hepatitis Virus, DHV)是一类小RNA病毒,能引起以肝炎为主要特征的雏鸭急性、高度致死性传染病。1周龄内雏鸭易感,死亡率高达95%,给我国养鸭业带来了较大的经济损失。目前国内外对鸭肝炎的研究主要集中在病毒基因组的测序和病毒的诊断技术等方面,对DVH发病机制和病毒感染过程中机体的应答机制等研究的报道尚不多见。本试验通过分别感染4日龄和21日龄雏鸭,采用实时荧光定量PCR检测感染过程中血液中病毒含量的变化和相关凋亡基因Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9和Bcl-2在脾脏、法氏囊、肝脏和肾脏组织中表达的变化,通过TUNEL染色,观察肝脏和脾脏细胞凋亡率的变化,研究细胞凋亡在鸭肝炎病毒感染机制中的作用。本研究主要完成了以下工作：(1)本试验通过实时荧光定量PCR检测4日龄和21日龄感染组雏鸭血清中病毒含量的变化,结果表明病毒含量的变化与肝细胞凋亡率的趋势一致,在24h感染后(p.i.)最高,此时发生明显的病理变化及细胞凋亡。而21日龄感染组雏鸭血清中病毒含量缓慢上升,病毒感染早期与细胞凋亡也有一定关系。(2)本试验采用实时荧光定量PCR检测4日龄雏鸭感染组脾脏、法氏囊、肝脏、肾脏组织中Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9和Bcl-2mRNA的变化。结果表明感染后脾脏中Caspase-8和Caspase-3表达呈上升趋势,而Bcl-2的表达下调；法氏囊中Caspase-3和Caspase-8表达成下降趋势,而Bcl-2从感染后12h表达上调；肝脏中Bcl-2的表达逐渐下调,而Caspase-3、8、9在感染后表达无明显上调趋势；肾脏中Bcl-2的表达无明显变化,而Caspase-3、Caspase-8和Caspase-9的表达仅在感染后48h略有上调。(3)本试验采用实时荧光定量PCR检测21日龄雏鸭感染组脾脏、法氏囊、肝脏、肾脏组织中Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9和Bcl-2mRNA的变化。结果表明感染后48h内Caspase-3、Caspase-8和Bcl-2在脾脏和法氏囊的表达先上调后下调,调控细胞凋亡的发生；与对照组比较肝脏中Caspase-8和Caspase-9的表达变化不大,在感染后6h Bcl-2和Caspase-3表达上调。肾脏中Caspase-3的表达呈下降趋势,而Bcl-2的表达在感染后12-24h上调,且达到最大。Caspase-8和Caspase-9的表达无明显变化趋势。(4)本试验通过对4日龄和21日龄雏鸭的肝脏和脾脏进行TUNEL染色,结果表明4日龄感染雏鸭肝脏细胞凋亡率逐渐上升,24h达到最大值,显著高于对照组；感染雏鸭脾脏细胞凋亡首先上升,6h后下降。21日龄感染雏鸭肝脏细胞凋亡率与对照组无明显差异,但感染后48h显著低于对照组；雏鸭脾脏细胞仅在感染后24h凋亡率显著高于对照组。以上结果表明在鸭肝炎病毒感染4日龄雏鸭初期肝脏、脾脏和法氏囊均发生细胞凋亡,促进病毒扩散,而21日龄感染组雏鸭病毒在促凋亡基因和抑凋亡基因的相互作用下细胞凋亡的发生不显著。
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