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目的：探讨瞬时感受器电位通道(TRPC1)在人脐静脉内皮细胞(HUVECs)细胞外钙受体(CaR)介导Ca2+内流和一氧化氮(NO)生成中的作用和机制。
方法：(1)用胰蛋白酶消化法原代培养HUVECs，收集HUVECs并做Ⅷ因子相关抗原鉴定。取二、三代细胞随机分为五组：细胞外不同浓度钙离子组；CaR处理组(包括精胺组、精胺+Ca2+组、Calhex231+精胺组、Calhex231+精胺+Ca2+组)；钙池操纵钙通道(SOC)组(MRS1645+精胺+Ca2+组)；TRPC处理组(SKF96365+精胺+Ca2+)；TRPC1siRNA处理组(包括TRPC1siRNA处理组：siTRPC1+精胺+Ca2+组；阳性对照组：siGAPDH+精胺+Ca2+组；阴性对照组：NCsiRNA+精胺+Ca2+组；空白对照组(Control)：未转染精胺+Ca2+组)。(2)利用转染技术将化学合成的TRPC1干扰片段(siTRPC1)转染入HUVECs中，使HUVECs中的TRPC1低表达。(3)分别采用免疫细胞化学技术、Western blot及RT-PCR技术检测CaR、TRPC1在HUVEC中蛋白、mRNA表达及TRPC1转染后的抑制效率。(4)各组分别通过Fura-2/AM负载HUVECs检测细胞内钙离子浓度([Ca2+]I)；通过NO荧光检测探针DAF-FM DA负载HUVECs检测细胞内NO的生成；并在提供充足底物的条件下检测HUVECs中内皮型一氧化氮合成酶(eNOS)可以催化产生的NO量，从而检测eNOS活性。(5)实验数据用均数±标准误表示，组间比较用单因素方差分析，均数间的比较采用t检验或卡方检验。所有数据采用SPSS13.0统计软件包进行分析，以P<0.05表示差异有统计学意义。
结果：(1)免疫细胞化学技术、Western blot及RT-PCR技术检测HUVECs中有CaR、TRPC1蛋白及mRNA表达。(2)在Fura-2/AM负载HUVECs中，[Ca2+]I荧光变化值的测定结果如下：与不同细胞外浓度钙离子组 (Δratio=0)相比，精胺组 (Δratio=0.3541±0.0186) [Ca2+]I明显增高(P<0.05)。与精胺组 (Δratio=0.3541±0.0186)相比，精胺+Ca2+组 (Δratio=0.4591±0.01259) [Ca2+]I升高(P<0.05)，而Calhex231+精胺组 (Δratio=0) [Ca2+]I明显降低(P<0.05)。与Calhex231+精胺组 (Δratio=0)相比，Calhex231+精胺+Ca2+组(Δratio=0.0318±0.0034) [Ca2+]I无差异(P>0.05)。与精胺+Ca2+组(Δratio=0.4591±0.01259)相比，Calhex231+精胺+Ca2+组(Δratio=0.0318±0.0034)、MRS1645+精胺+Ca2+组(Δratio=0.3333±0.0127)、SKF96365+精胺+Ca2+组(Δratio=0.3478±0.0154) [Ca2+]I均降低(P<0.05)。与空白对照组(Control) (Δratio=0.4593±0.01959)相比，siTRPC1003组 (Δratio=0.3421±0.0134) [Ca2+]I降低(P<0.05)，而siGAPDH组 (Δratio=0.4582±0.01328)及NCsiRNA组 (Δratio=0.4573±0.011292) [Ca2+]I无差异(P>0.05)。(3)在DAF-FM DA负载HUVECs中，NO净荧光强度值的测定结果如下：与精胺组(578.7228±33.5469)相比，精胺+Ca2+组(1729.5841±67.4865) NO净荧光强度值明显升高(P<0.05)，而Calhex231+精胺组(274.3576±16.1394) NO净荧光强度值降低(P<0.05)。与Calhex231+精胺组(274.3576±16.1394)相比，Calhex231+精胺+Ca2+组(400.5451±29.9196) NO净荧光强度值无差异(P>0.05)。与精胺+Ca2+组(1729.5841±67.4865)相比，Calhex231+精胺+Ca2+组(400.5451±29.9196)、MRS1645+精胺+Ca2+组(385.2674±34.9324)、SKF96365+精胺+Ca2+组(444.7751±36.50255) NO净荧光强度值均明显降低(P<0.05)。与Control组(1718.9414±73.0836) 相比，siTRPC1组(316.8843±16.5891) NO净荧光强度值明显降低(P<0.05)，而siGAPDH组(1704.9447±71.5716)及NCsiRNA组(1710.6366±66.0442) NO净荧光强度值无差异(P>0.05)。(4)在DAF-FM DA负载HUVECs中，细胞内eNOS的活性测定结果如下：与精胺组(1.458333±0.058333)相比，精胺+Ca2+组(2.133333±0.09055)细胞内eNOS的活性升高(P<0.05)，而Calhex231+精胺组(0.358333±0.062915)细胞内eNOS的活性降低(P<0.05)。与Calhex231+精胺组(0.358333±0.062915)相比，Calhex231+精胺+Ca2+组(0.670833±0.113116)细胞内eNOS的活性无差异(P>0.05)。与精胺+Ca2+组(2.133333±0.09055)相比，Calhex231+精胺+Ca2+组(0.670833±0.113116)、MRS1645+精胺+Ca2+组(1.395833±0.074652)、SKF96365+精胺+Ca2+组(1.345833±0.0356)细胞内eNOS的活性均降低(P<0.05)。与Control组(2.133333±0.09055)相比，siTRPC1组(1.335833±0.02756)细胞内eNOS的活性降低(P<0.05)，而siGAPDH组(2.113583±0.08216)及NCsiRNA组(2.123583±0.08195)细胞内eNOS的活性无差异(P>0.05)。
结论：(1)钙离子作为CaR的配体在HUVECs中未能激活CaR介导的[Ca2+]I增加。(2)精胺刺激下介导的[Ca2+]I升高、NO生成及eNOS活性增加，既有内钙释放，又有外钙内流参与。(3)精胺刺激下介导的上述变化是通过激活CaR途径实现的，此过程中外钙内流是由SOC通道介导，TRPC1作为SOC通道最有可能的候选基因参与了CaR介导的上述过程。
方法：(1)用胰蛋白酶消化法原代培养HUVECs，收集HUVECs并做Ⅷ因子相关抗原鉴定。取二、三代细胞随机分为五组：细胞外不同浓度钙离子组；CaR处理组(包括精胺组、精胺+Ca2+组、Calhex231+精胺组、Calhex231+精胺+Ca2+组)；钙池操纵钙通道(SOC)组(MRS1645+精胺+Ca2+组)；TRPC处理组(SKF96365+精胺+Ca2+)；TRPC1siRNA处理组(包括TRPC1siRNA处理组：siTRPC1+精胺+Ca2+组；阳性对照组：siGAPDH+精胺+Ca2+组；阴性对照组：NCsiRNA+精胺+Ca2+组；空白对照组(Control)：未转染精胺+Ca2+组)。(2)利用转染技术将化学合成的TRPC1干扰片段(siTRPC1)转染入HUVECs中，使HUVECs中的TRPC1低表达。(3)分别采用免疫细胞化学技术、Western blot及RT-PCR技术检测CaR、TRPC1在HUVEC中蛋白、mRNA表达及TRPC1转染后的抑制效率。(4)各组分别通过Fura-2/AM负载HUVECs检测细胞内钙离子浓度([Ca2+]I)；通过NO荧光检测探针DAF-FM DA负载HUVECs检测细胞内NO的生成；并在提供充足底物的条件下检测HUVECs中内皮型一氧化氮合成酶(eNOS)可以催化产生的NO量，从而检测eNOS活性。(5)实验数据用均数±标准误表示，组间比较用单因素方差分析，均数间的比较采用t检验或卡方检验。所有数据采用SPSS13.0统计软件包进行分析，以P<0.05表示差异有统计学意义。
结果：(1)免疫细胞化学技术、Western blot及RT-PCR技术检测HUVECs中有CaR、TRPC1蛋白及mRNA表达。(2)在Fura-2/AM负载HUVECs中，[Ca2+]I荧光变化值的测定结果如下：与不同细胞外浓度钙离子组 (Δratio=0)相比，精胺组 (Δratio=0.3541±0.0186) [Ca2+]I明显增高(P<0.05)。与精胺组 (Δratio=0.3541±0.0186)相比，精胺+Ca2+组 (Δratio=0.4591±0.01259) [Ca2+]I升高(P<0.05)，而Calhex231+精胺组 (Δratio=0) [Ca2+]I明显降低(P<0.05)。与Calhex231+精胺组 (Δratio=0)相比，Calhex231+精胺+Ca2+组(Δratio=0.0318±0.0034) [Ca2+]I无差异(P>0.05)。与精胺+Ca2+组(Δratio=0.4591±0.01259)相比，Calhex231+精胺+Ca2+组(Δratio=0.0318±0.0034)、MRS1645+精胺+Ca2+组(Δratio=0.3333±0.0127)、SKF96365+精胺+Ca2+组(Δratio=0.3478±0.0154) [Ca2+]I均降低(P<0.05)。与空白对照组(Control) (Δratio=0.4593±0.01959)相比，siTRPC1003组 (Δratio=0.3421±0.0134) [Ca2+]I降低(P<0.05)，而siGAPDH组 (Δratio=0.4582±0.01328)及NCsiRNA组 (Δratio=0.4573±0.011292) [Ca2+]I无差异(P>0.05)。(3)在DAF-FM DA负载HUVECs中，NO净荧光强度值的测定结果如下：与精胺组(578.7228±33.5469)相比，精胺+Ca2+组(1729.5841±67.4865) NO净荧光强度值明显升高(P<0.05)，而Calhex231+精胺组(274.3576±16.1394) NO净荧光强度值降低(P<0.05)。与Calhex231+精胺组(274.3576±16.1394)相比，Calhex231+精胺+Ca2+组(400.5451±29.9196) NO净荧光强度值无差异(P>0.05)。与精胺+Ca2+组(1729.5841±67.4865)相比，Calhex231+精胺+Ca2+组(400.5451±29.9196)、MRS1645+精胺+Ca2+组(385.2674±34.9324)、SKF96365+精胺+Ca2+组(444.7751±36.50255) NO净荧光强度值均明显降低(P<0.05)。与Control组(1718.9414±73.0836) 相比，siTRPC1组(316.8843±16.5891) NO净荧光强度值明显降低(P<0.05)，而siGAPDH组(1704.9447±71.5716)及NCsiRNA组(1710.6366±66.0442) NO净荧光强度值无差异(P>0.05)。(4)在DAF-FM DA负载HUVECs中，细胞内eNOS的活性测定结果如下：与精胺组(1.458333±0.058333)相比，精胺+Ca2+组(2.133333±0.09055)细胞内eNOS的活性升高(P<0.05)，而Calhex231+精胺组(0.358333±0.062915)细胞内eNOS的活性降低(P<0.05)。与Calhex231+精胺组(0.358333±0.062915)相比，Calhex231+精胺+Ca2+组(0.670833±0.113116)细胞内eNOS的活性无差异(P>0.05)。与精胺+Ca2+组(2.133333±0.09055)相比，Calhex231+精胺+Ca2+组(0.670833±0.113116)、MRS1645+精胺+Ca2+组(1.395833±0.074652)、SKF96365+精胺+Ca2+组(1.345833±0.0356)细胞内eNOS的活性均降低(P<0.05)。与Control组(2.133333±0.09055)相比，siTRPC1组(1.335833±0.02756)细胞内eNOS的活性降低(P<0.05)，而siGAPDH组(2.113583±0.08216)及NCsiRNA组(2.123583±0.08195)细胞内eNOS的活性无差异(P>0.05)。
结论：(1)钙离子作为CaR的配体在HUVECs中未能激活CaR介导的[Ca2+]I增加。(2)精胺刺激下介导的[Ca2+]I升高、NO生成及eNOS活性增加，既有内钙释放，又有外钙内流参与。(3)精胺刺激下介导的上述变化是通过激活CaR途径实现的，此过程中外钙内流是由SOC通道介导，TRPC1作为SOC通道最有可能的候选基因参与了CaR介导的上述过程。