小麦条锈病是一种重要的世界性的小麦叶部病害,培育抗病品种是控制小麦条锈病的经济有效的途径。然而,大面积推广种植单一抗病品种又常常促使条锈菌新小种的产生和发展,而最终导致小麦品种抗病性的“丧失”,目前这一状况已成为抗病品种应用中突出的问题。目前,小麦与条锈菌互作的研究主要集中在形态学、细胞学、组织学、遗传学等方面,然而对于小麦与条锈菌互作的分子机理及事件仍不清楚。因此,开展对小麦与条锈菌互作关系的分子机理研究,揭示病原物和寄主互相的分子机制,对于小麦抗条锈性的合理利用和小麦条锈病的可持续控制具有重要的理论和实际意义。为了更全面地了解小麦与条锈菌非亲和过程中所有基因的表达情况,全面揭示互作的分子机制,本研究以接种CY23生理小种后第16 h、24 h、36h和48h的水源11小麦叶片为建库材料,提取各时间点的总RNA并等量混合,用SMARTTM cDNA Library Construction Kit首次构建小麦条锈菌接种初期非亲和互作的cDNA文库。得到原始文库滴度1.2×106 pfu/mL,扩增文库滴度2×109 pfu/mL,重组率97%,插入片段在0.4 kb到3 kb之间。对文库随机挑取5200多个克隆进行单向测序,测序原始序列通过初步的如去载体序列、重复序列等处理后,共获得1515条高质量ESTs序列,CAP3聚类结果获得494个Contigs和1021个独立的ESTs。经Blast比对分析,发现在所有的Unigenes中,未知功能蛋白和Blastx比对后没有显著匹配的序列(nohits)共占46%,为最大类。功能已知的ESTs中,能量和代谢相关的基因为第一大类,约占32%,其中与光合作用相关的基因,如1, 5-二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶(Rubisco)、叶绿体前体、叶绿素a/b结合蛋白,光合体系蛋白等在统计结果中出现的频率最高;功能不确定或者不清楚地为第二类,约占22%;第三大类是编码防卫及抗病相关蛋白的基因,包括一些编码诱导抗性蛋白、多种病程相关蛋白(PR蛋白)(包括多种蛋白酶抑制剂和葡聚糖酶)等参与植物系统获得性抗性(SAR)途径的基因,还有编码花粉过敏反应原Phl p 4参与过敏性坏死反应途径的基因;此外为信号转导、蛋白质合成加工、转运等相关基因;最小的一类中,主要包括编码一些大肠杆菌等其他原核生物的基因。从中挑取了一定数量的感兴趣的基因进行转录水平的分析,以验证其在寄主与病原菌非亲和过程中的功能,从而达到挖掘新的抗性基因的目的。