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捕光叶绿素a/b结合蛋白基因(chlorophyll a/b binding protein gene,Cab)启动子在多种植株中已被验证具有绿色组织特异性。本实验克隆了甜橙[Critus sinensis (L.) Osbeck]捕光叶绿素a/b结合蛋白基因的全长序列。以此为基础利用染色体步移法克隆了该基因转录起始位点上游的调控序列,并研究该调控序列在转基因番茄中的表达情况。主要结果如下：1.通过。chlorophyll a/b binding protein gene"为关键词在NCBI中检索,获得部分柠檬Cab氨基酸序列,以及马尾松、麻风树等16种植物的Cab全长氨基酸序列等信息。利用DNAman比对上述序列,在保守区设计特异引物,以甜橙总RNA反转录产物为模板PCR扩增得到甜橙Cab基因的部分cDNA序列,284bp。利用RACE技术扩增得到了甜橙Cab基因的全长999bp序列,通过生物信息学分析发现甜橙Cab基因全长cDNA为795bp,编码264个氨基酸。根据甜橙Cab基因全长cDNA序列的编码区两端设计引物,以甜橙基因组DNA为模板,克隆了Cab的全长基因。2.利用染色体步移技术,以甜橙基因组DNA为模板,通过3轮热不对称PCR克隆了甜橙Cab基因转录起始位点上游708bp序列。将获得的序列分别提交PLACE和Plant Care服务器进行分析,发现该序列存在一般启动子的保守元件TATA-box和CAAT-box,以及决定组织特异表达的GATA-box,此外还有一些与光应答反应的顺势元件等。3.以GUS为报告基因,利用该启动子构建表达载体,农杆菌介导法转化番茄,获得了转基因番茄植株,研究该调控序列的组织表达特异性。4.对转基因番茄植株的叶、花、未成熟呈绿色的果实、成熟呈红色的果实进行Gus组织化学染色分析,发现转入PBI121表达载体的植株中Gus报告基因在叶、花、未成熟呈绿色的果实、成熟呈红色的果实都表达。在转入甜橙Cab基因启动子+报告基因Gus表达载体的植株中叶和未成熟呈绿色的果实中Gus基因表达,在花和成熟呈红色的果实中不表达。