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急性白血病是造血干细胞恶性克隆性疾病,在近年来其发病率和死亡率呈增加趋势,是一种较常见的恶性肿瘤,严重地威胁着人类的健康。白血病的发生、发展是多基因、多事件累积的结果,其过程涉及到许多瘤基因的激活和或抑瘤基因的失活,因此从分子水平阐明白血病的发病机制对白血病的防治具有十分重要的意义。DLK1基因定位于人染色体14q32,全长1557 bP,编码序列(codingsequence,CDS)含有1152核苷酸,编码383个氨基酸残基。DLK1基因在肝癌、大鼠的嗜铬细胞瘤、人类神经母细胞瘤、人类肺小细胞癌、脑胶质瘤中的表达上调,在肾细胞癌中表达下调,能够高表达DLK1的肿瘤似乎都具有神经内分泌的特性。而DLK1在其他恶性肿瘤如白血病中的表达特性尚需进一步探讨。目的:研究DLK1基因在急性白血病中的表达,及其与外周血白细胞数量、血小板数量的关系,以及在红系分化中的作用。探讨其在白血病中表达的意义。方法:1.采用逆转录多聚酶链式反应(Reverse TranscriptionPolymerase Chain Reaction,RT-PCR)、western blotting方法检测人类不同类型急性白血病中DLK1的表达,分析DLK1表达与急性白血病病人临床特征的相关性。2.以人K562细胞株为研究对象,用氯化高铁血红素(hemin)诱导其向红系分化,在分化的各时间点抽取RNA,用RT-PCR法测定各时间点DLK1的表达情况,观察其与红系分化的关系。结果:1.65例急性白血病患者和34例对照组的骨髓单个核细胞总RNA经RT-PCR后均扩增出一条252bP的目的cDNA片段,提示白血病细胞、正常骨髓单个核细胞表达DLK1。与内参GAPDH相比,急性白血病患者表达量为0.574±0.173,其中急性淋巴细胞白血病患者表达量为0.579±0.172,急性髓系白血病患者表达量为0.571±0.175,对照组表达量为0.488±0.160,试验组DLK1的相对表达量均高于正常对照组,实验组和对照组比较有显著性差异(t=-2.406,P=0.018;t=-2.023,P=0.048;t=-2.146,P=0.035),急性淋巴细胞白血病患者和急性髓系白血病患者之间DLK1的相对表达量无显著差异(P＞0.05)。2.65例急性白血病患者外周血白细胞计数和血小板计数,经pearson相关分析,结果显示DLK1基因的表达水平与白血病患者外周血白细胞数无明显相关性(r=-0.178,P=0.155);与外周血血小板数亦无明显相关性(r=-0.195,P=0.120)。3.20例急性白血病患者骨髓单个核细胞所抽提的蛋白经western blotting检测发现,急性白血病病人中,6/16 AML,2/4 ALL低表达DLK1蛋白,1/13对照组表达极低水平的DLK1蛋白,DLK1蛋白在急性白血病和对照组中的表达差异有统计学意义(X~2=4.146,P=0.042),但同一样本DLK1蛋白的表达和mRNA的表达不一致。K562细胞表达DLK1蛋白,HL-60细胞不表达DLK1蛋白。4.K562细胞的总RNA经RT-PCR后扩增出一条252bP的目的cDNA片段,提示K562细胞表达DLK1。HL-60细胞未扩增出条带,不表达DLK1。通过RT-PCR检测了hemin诱导K562细胞向红系分化过程中各时间点DLK1mRNA的变化,显示随着K562向红系分化,DLK1mRNA的水平逐渐下降。结论:1.急性白血病细胞、正常骨髓单个核细胞均表达DLK1。该基因在急性白血病细胞中表达上调。2.DLK1基因参与了急性白血病的发病过程,但DLK1基因mRNA的表达水平与急性白血病患者初治时外周血白细胞计数和血小板计数无相关性。3.急性白血病细胞DLK1蛋白的阳性表达率高于对照组,与mRNA的表达趋势一致。4.DLK1基因可能参与K562细胞向红系分化的过程,可能抑制其分化。