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目的溶酶体贮积症(lysosomal storage disease,LSD)在胎儿期可以表现为非免疫性胎儿水肿(non-immune hydrops fetalis,NIHF)、孤立性胎儿腹水、胎儿生长受限(fetal growth restriction,FGR)、胎儿肝脾肿大及骨骼发育不良。尽管LSD被认为是罕见的遗传代谢疾病,但因其有明显的再发风险,明确诊断有重要意义。因此临床产前诊断中,需要建立一种筛查方法以检出这些疾病。14种LSD与NIHF建立了很强的联系,其中最常见的是粘多糖贮积症(mucopolysaccharidosis,MPS)、戈谢病(Gaucherdisease)、GM1 神经节苷脂贮积症(GM1 gangliosidosis)和异染性脑白质营养不良(metachromatic leukodystrophy,MLD)。从特发性NIHF中筛查这些LSD是降低成本、提高检出率的可行办法。在NIHF的侵入性产前诊断中,最常获得的胎儿标本是羊水。这些LSD可以通过检测羊水细胞中L-α-艾杜糖苷酶、半乳糖-6-硫酸酯酶、β-葡萄糖醛酸酶、β-葡萄糖苷酶、芳基硫酸酯酶A和β-半乳糖苷酶的活性发现其存在。因此我们拟建立本实验室产前筛查溶酶体酶活性的检测方法和参考值范围,以探讨酶活性检测产前诊断中的应用,提高特发性NIHF的病因诊断率。材料与方法本研究纳入了无不良妊娠史及家族史、胎儿超声无明显异常且经羊水染色体检查结果正常的羊水,共68例。孕妇行羊水穿刺的适应症包括高龄和染色体非整倍体高风险,羊水穿刺在妊娠第16至22周之间进行。所有羊水经细胞培养进行扩增,在21至28天用细胞刮刀收获,并于-80℃冻存。检测羊水细胞酶活性时将其迅速解冻,以双蒸水裂解细胞膜,并通过超声粉碎仪制成细胞匀浆。细胞匀浆的蛋白质浓度用BCA蛋白试剂盒测定。采人工合成荧光底物测定人羊水细胞中L-α-艾杜糖苷酶、半乳糖-6-硫酸酯酶、β-葡萄糖醛酸酶、β-葡萄糖苷酶和β-半乳糖苷酶的活性,用比色法测定芳基硫酸酯酶A的活性。酶活性属于连续性计量资料,本研究样本量较小,采用Q-Q图和散点图的方法检验数据是否符合正态分布,结果以平均值±标准差(x±s)表示,计算酶活性的95%置信区间。结果建立了本实验室检测羊水细胞中L-α-艾杜糖苷酶、半乳糖-6-硫酸酯酶、β-葡萄糖醛酸酶、β-葡萄糖苷酶和芳基硫酸酯酶A活性的方法,未能检测出β-半乳糖苷酶的活性。本实验室羊水细胞中五种溶酶体酶活性的参考范围:L-α-艾杜糖苷酶 61.95±4.93(52.00～71.91)nmol/mg·pro/h N=41半乳糖-6-硫酸酯酶 114.63±17.53(97.10～132.16)nmol/mg·pro/17h N=43β-葡萄糖醛酸酶 66.86±4.47(57.92～75.79)nmol/mg·pro/h N=62β-葡萄糖苷酶 95.94±8.23(79.45～112.44)nmol/mg·pro/h N=56芳基硫酸酯酶 A 570.04±59.18(449.17～690.90)nmol/mg·pro/17h N=31结论建立了本实验室人羊水细胞中L-α-艾杜糖苷酶、半乳糖-6-硫酸酯酶、β-葡萄糖醛酸酶、β-葡萄糖苷酶和芳基硫酸酯酶A五种溶酶体酶的检测方法和正常活性参考范围,为NIHF的产前诊断和病因学分析提供了新的筛查方法。溶酶体酶的活性在一般人群中变异较大,酶活性低于参考值下限不足以诊断溶酶体贮积症,但可以作为一种排除手段,应用于NIHF的病因学分析。有必要时应检测羊水中的糖胺聚糖(glycosaminoglycan,GAGs)的浓度和进一步行分子遗传学诊断。