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第一部分维生素D3联合二甲双胍对人乳腺癌细胞株MDA-MB-231的协同抗肿瘤作用及其机制目的:研究维生素D3联合二甲双胍对乳腺癌细胞株MDA-MB-231的凋亡诱导作用及其机制。方法:①采用四唑氮蓝比色法(MTT)检测维生素D3联合二甲双胍对细胞增殖的影响;②Hoechst 33342染色后用荧光显微镜观察单药以及联合用药处理后细胞凋亡情况;③Western blot检测凋亡相关基因p-Bcl-2、Bax、Cleaved caspase-3、c-Myc蛋白的含量变化,以及相关信号通路活化蛋白p-IGF-IR、p-AMPK、p-mTOR、p-S6、p-P70S6K 含量变化。结果:①MTT法实验表明:280μg/ml、300μg/ml、320μg/ml的维生素D3联合15000 μg/ml的二甲双胍联合作用于细胞24h均有明显的协同作用,抑制率明显提高;②荧光显微镜观察单药处理组和联合用药处理组细胞凋亡状态情况:与阴性对照组比较,维生素D3和二甲双胍单药处理组均可引起一定程度的细胞凋亡,联合用药处理组凋亡特征明显,凋亡数量明显增多;③Western Blot检测显示:与阴性对照组和单药处理组相比,联合用药组p-Bcl-2蛋白表达水平明显降低,c-Myc蛋白表达水平明显降低,Cleaved caspase-3和Bax蛋白表达水平明显升高,p-IGF-IR蛋白表达水平明显降低,差别均具有显著性;与阴性对照组相比,联合用药组p-AMPK蛋白表达均明显升高,p-mTOR、p-P70S6K和p-S6蛋白表达水平明显降低,差别均具有显著性。结论:维生素D3联合二甲双胍对乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖的抑制作用具有明显的协同作用,其机制可能与抑制癌基因p-Bcl-2、c-Myc蛋白的表达,以及促进抑癌基因Cleaved caspase-3和Bax蛋白的表达有关;另外,维生素D3联合二甲双胍的协同作用可能还与激活p-AMPK蛋白表达和下调p-IGF-IR的蛋白表达量,进而下调p-mTOR、p-P70S6K和p-S6蛋白表达有关。第二部分维生素D3增强二甲双胍对人膀胱癌细胞株SW-780的凋亡诱导作用及其机制目的:研究维生素D3联合二甲双胍对人膀胱癌细胞株SW-780的增殖及凋亡的影响,并探讨其可能存在的机制。方法:①采用四唑氮蓝比色法(MTT)检测维生素D3联合二甲双胍对细胞增殖的影响;②Hoechst 33342染色后在荧光显微镜下观察单药以及联合用药处理组的细胞凋亡情况;③western blot检测凋亡相关基因p-Bcl-2、Bax、CyclinD1、c-Myc蛋白的含量变化,以及相关信号通路活化蛋白p-IGF-IR、p-mTOR、p-P70S6K、p-S6 含量变化。结果:①MTT法实验表明:320 μg/ml的维生素D3联合620 μg/ml的二甲双胍作用于细胞48h后呈现出明显的协同作用;②荧光显微镜观察单药处理组和联合用药处理组细胞形态学变化:与阴性对照组和单药处理组相比,联合用药处理组凋亡特征明显,凋亡数量明显增多;③Western Blot检测结果表明:与阴性对照组和单药处理组相比,联合用药组p-Bcl-2、CyclinD1及c-Myc蛋白表达水平明显降低,Bax蛋白表达水平明显升高,p-mTOR、p-P70S6K和p-S6以及p-IGF-IR蛋白表达水平明显降低,差别均具有显著性。结论:维生素D3联合二甲双胍对人膀胱癌细胞株SW-780的生长抑制及凋亡诱导具有较明显的协同作用,其机制可能与抑制癌基因p-Bcl-2、CyclinD1和c-Myc蛋白的表达,以及促进抑癌基因Bax蛋白的表达有关,还可能与抑制p-IGF-IR、p-mTOR、p-P70S6K 和 p-S6 蛋白表达有关。