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本文以丙酯化魔芋葡甘低聚糖 (KGM)为原料,经甲酰胺-氯磺酸酯化得到魔芋低聚 KGM 醛酸丙酯硫酸酯钠盐 (HOGS),从 HOGS 的分离纯化、结构分析和抗病毒活性三个方面进行了研究。
(1) 甲酰胺-氯磺酸法制备 HOGS,乙醇沉淀法提取,717 阴离子交换树脂分离纯化,然后进行透析脱盐,冷冻干燥后得到纯净的 HOGS。硫酸-蒽酮法测定其糖含量为 64.09%,比浊法测定其硫酸基含量为 33.11%。采用 SephadexG-25 凝胶层析和醋酸纤维薄膜电泳进行纯度鉴定,凝胶层析结果显示只有一个峰,醋酸纤维薄膜电泳显示只有一条蓝色条带,表明所得HOGS 为一均一成分的低聚糖,然后将一次磺化 HOGS 样品再次硫酸化,经分离纯化后得二次磺化HOGS样品。
(2) 利用高效液相色谱 (HPLC)、傅立叶红外光谱 (FT-IR)、激光拉曼光谱 (RS)、X 衍射光电子能谱 (XPS)、核磁共振波谱 (NMR)、凝胶色谱 (GPC) 等现代仪器分析手段对 HOGS 的结构进行分析。结果表明低聚 KGM 经丙酯化修饰和硫酸酯化后,糖环的C<,2>和C<,3>位的羟基上和 C<,6>位连接的羟丙基上的羟基接有硫酸基团,且硫元素的相对含量为7.94%,二次磺化后得到的HOGS 经过XPS分析显示S元素含量比一次磺化 HOGS 提高了约40%。
(3)在抗脊髓灰质炎病毒(PV)中采用一次磺化HOGS样品,利用MTT法研究了 HOGS 抗PV作用,结果表明 HOGS 在浓度为 1.25mg/mL 以内时对Hela细胞无明显细胞毒性作用,细胞的半数中毒浓度TC<,50>为 1.5399mg/ml。将HOGS与病毒的不同作用方式进行分组进行了HOGS抗PV病毒作用的研究。结果表明HOGS对细胞有较好的保护作用,能抑制PV在细胞内的增殖,而且对PV的吸附、穿入等环节随着时间的延长其效果有所增强,其最小有效浓度为 0.01562mg/ml。在抗乙肝病毒(HBV) 中同样采用一次磺化HOGS 样品,利用MTT法和ELISA法,研究了HOGS对HepG<,2>-2.2.15 细胞表达 HBsAg、HBeAg 的影响。结果表明,HOGS 在 0.125mg/mL~1mg/mL 浓度范围对HepG<,2>-2.2.15 细胞没有明显的细胞毒性作用,细胞的半数中毒浓度 TC<,50>为 1.4753mg/mL;并且可明显抑制HepG<,2>-2.2.15 细胞HBsAg的表达,其半数有效浓度IC<,50>为0.2675mg/mL,抑制指数(TI)达5.52,表明HOGS具有一定的体外抗 HBV作用。
(4)在抗柯萨奇病毒(CVB<,3>)中采用二次磺化HOGS 样品,利用MTT法研究了HOGS 抗 CVB<,3>作用,结果显示HOGS在浓度为 0.5mg/ml 以下时均无明显细胞毒性作用,细胞的半数中毒浓度 TC<,50>为 0.6677mg/ml。将 HOGS 与病毒的不同作用方式进行分组进行了 HOGS 抗 CVB<,3>作用的研究。结果显示对CVB<,3>侵入细胞的阻断作用组效果较好,其半数有效浓度IC<,50>为 0.1483mg/ml,TI 值为 4.50;同时将一次磺化 HOGS样品抗病毒药效进行对比,对 CVB<,3>侵入细胞的阻断作用组IC<,50>为0.3767mg/ml,TI值为4.09。由此可表明一次及二次磺化HOGS能有效地抗CVB3的作用,且二次磺化HOGS效果更明显。在抗流感病毒中采用二次磺化HOGS样品,采用MTT法测细胞毒性,结果表明HOGS在浓度为0.5mg/ml以下时均无明显细胞毒性作用,通过测定红细胞血凝效价,得知HOGS可在一定程度上降低病毒感染细胞的血凝效价,其最小有效浓度为0.03125mg/mL。与一次磺化HOGS的血凝效价结果进行对比,得知二次磺化 HOGS 抑制病毒效果明显优于一次磺化HOGS。说明抗病毒活性与硫酸根的含量正相关。