论文部分内容阅读
目的:本实验采用HPLC-MS建立了快速定性定量人参皂苷的方法,研究人参皂苷Rc、Rd、Re对人神经胶质瘤SHG-44、U251MG细胞的抗肿瘤作用。方法:在人参皂苷的定性、定量分析中,运用超高效液相色谱仪(Thermo Ultimate3000)与三重四极杆质谱仪(Thermo TSQ Endura)联用技术,建立快速定性、定量检测的方法;采用不同浓度的人参皂苷Rc、Rd、Re分别作用人神经胶质瘤细胞SHG-44、U251MG,利用CCK-8方法检测SHG-44、U251MG细胞增殖活性,显微镜下常光观察细胞形态,流式细胞术检测细胞周期的变化,Annexin V/FITC双染法检测细胞的凋亡情况,研究人参皂苷Rc、Rd、Re对人神经胶质瘤细胞SHG-44、U251MG的作用机制。结果:在人参皂苷的定性、定量分析中,运用HPLC-MS可快速分析生晒参提取物中13种人参皂苷类成分;同时对人参皂苷Rc、Rd、Re进行定量分析,人参皂苷Rc、Re在2-20μg/mL范围内线性关系良好,相关系数分别为0.9994、0.9991,人参皂苷Rd在0.2-2μg/mL范围内线性关系良好,相关系数为0.9951,测得生晒参提取物中人参皂苷Rc、Rd、Re含量分别为2.59±0.03 mg/g、0.22±0.01 mg/g、4.19±0.04 mg/g。人参皂苷Rc、Rd、Re对SHG-44、U251MG细胞的活性研究表明,人参皂苷Rc(1-100μg/mL)对SHG-44细胞抑制增殖作用较弱,人参皂苷Rc(12.5-200μg/mL)对U251MG抑制作用也较弱;人参皂苷Rd(100μg/mL)作用SHG-44细胞72h后,细胞增殖抑制率可达97.28±0.94%;人参皂苷Rd(200μg/mL)作用U251MG细胞24、48、72h,细胞增殖抑制率为94.51±1.86%、93.86±0.40%、95.32±0.68%;人参皂苷Re(200μg/mL)作用U251MG细胞72h后,细胞增殖抑制率为51.96±2.36%。细胞周期结果表明,人参皂苷Rd(100μg/mL)作用72h能够将SHG-44周期阻滞在S期,人参皂苷Rd(200μg/mL)作用24h将U251MG细胞周期阻滞在S期。细胞凋亡结果表明,人参皂苷Rd(100μg/mL)作用72h后SHG-44细胞的晚期凋亡及总凋亡比例显著升高(P<0.05),具有诱导细胞凋亡的作用;人参皂苷Rd(200μg/mL)作用24h细胞的早期凋亡及晚凋亡比例升高,可在一定程度上促进U251MG细胞凋亡。利用显微镜常光下观察,可见加药组细胞连接减少,细胞皱缩,体积变小,且悬浮的死细胞逐渐增多。结论:本研究内容运用HPLC-MS建立了快速定性、定量分析检测生晒参提取物的方法;人参皂苷Rd对人神经胶质瘤细胞SHG-44、U251MG具有显著抑制细胞增殖的作用,其机制是通过对SHG-44、U251MG细胞周期的调控,诱导SHG-44、U251MG细胞凋亡。本实验为建立人参皂苷的提取、分离、分析及生物活性评价的实验方法流程提供参考作用,并挖掘人参皂苷在抗肿瘤方面的应用。