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目的糖尿病肾病(DN)是糖尿病常见的微血管并发症,约20%-40%的DN患者进展为终末期肾病,严重危害人类健康,DN发病机制非常复杂,目前尚未完全阐明,现代医学主要依靠控制血糖、降脂以及血管紧张素转化酶抑制剂和血管紧张素受体阻断剂类药物的应用控制DN的发展。中医药在防治DN方面显示出明显的特色与优势。寻找安全、高效的治疗DN中药及其机制探讨是目前研究热点之一。本研究以链脲佐菌素诱导的1型糖尿病肾病大鼠和自发性2型糖尿病肾病动物模型OLETF大鼠为研究对象,在验证糖肾方药物作用基础上,从致糖尿病肾病的重要生长因子TGF-β1及细胞外基质合成降解失衡为切入点,探讨糖肾方防治糖尿病肾病的作用机理,为临床应用提供理论依据。方法1.采用单侧肾切除加链脲佐菌素腹腔注射建立1型糖尿病肾病大鼠模型,随机分为模型组、糖肾方大剂量组、糖肾方小剂量和蒙诺组,另设假手术组为空白组。分别于第0、4、8、12、16、20周动态观察大鼠一般状态、体重、血糖、尿蛋白/肌酐,第20周时动物取材,血液流变仪检测全血粘度及血浆粘度,血生化仪检测血脂、血清总蛋白、白蛋白及肾功的变化,半定量评价肾组织肾小球及肾小管间质病理变化;采用免疫组化法检测肾组织及Ⅳ型胶原表达变化,RT-PCR方法测定肾组织TGF-β1、MMP-2及MMP-9表达。2.从国外引进自发性2型糖尿病肾病模型OLETF大鼠,随机分为模型组、糖肾方组和蒙诺组,以遗传背景相同、同周龄、性别的LETO大鼠为空白组。每4周观察大鼠一般状态、体重、血糖、24h尿蛋白定量,分别连续给药24周及44周,于这两个时间点分别取材,血液流变仪检测全血粘度及血浆粘度,血生化仪检测血脂、血清总蛋白、白蛋白及肾功的变化,半定量评价肾组织肾小球及肾小管间质病理变化。结果1.糖肾方对链脲佐菌素诱导的1型糖尿病肾病大鼠的作用:模型组从实验第0周起,状态与体重即明显差于空白组,且随实验的进行差异持续增加,到第20周差异达峰值,与模型组相比,各给药组大鼠状态均有明显改善,糖肾方小剂量组体重从第4周起显著升高并持续至实验结束;模型组大鼠尿蛋白/肌酐从12周起显著升高,糖肾方组与蒙诺组从16周开始能显著降低模型组大鼠尿蛋白/肌酐,模型组大鼠血糖、胆固醇、甘油三酯、血浆粘度,血尿素氮、肾小球硬化指数及肾小管间质纤维化指数均显著高于空白组,糖肾方大剂量组能显著降低模型动物血浆粘度(P＜0.05),胆固醇(P＜0.05)及甘油三酯含量(P＜0.01),降低肾小球硬化指数(P＜0.01)和肾小管间质纤维化指数(P＜0.01),糖肾方对模型组大鼠血糖及尿素氮无明显影响,各实验组全血粘度、血清总蛋白、白蛋白及肌酐无显著性差异。2.糖肾方对链脲佐菌素诱导的1型糖尿病肾病大鼠的TGF-β1、MMP-2及MMP-9、Ⅳ型胶原表达影响:免疫组化结果显示:模型组肾组织在肾小球及小管间质表达均显著升高,与空白组比较有显著性差异,糖肾方大、小剂量组与蒙诺组TGF-β1及Ⅳ型胶原表达与模型组相比显著降低。RT-PCR实验表明:与空白组相比,模型组肾组织TGFβ1 mRNA表达水平显著升高,MMP-9 mRNA显著降低,糖肾方大量组与蒙诺组能显著降低模型组大鼠肾组织TGFβ1 mRNA表达,升高MMP-9 mRNA水平,各实验组肾组织MMP-2 mRNA表达无显著性差异。2.糖肾方对自发性2型糖尿病肾病OLETF大鼠的作用:模型组大鼠体重从6周龄起显著高于空白组,在40周龄时差异达最大,随后差异逐渐减小,至52周龄时与空白组体重无显著性差异。糖肾方在40、44、48周龄能显著降低模型组大鼠体重;模型组血糖及24h尿蛋白水平从6周龄起与空白组显著升高,且随实验周期呈渐进性进展,至56周龄时差异最大,糖肾方从36周龄起与24h尿蛋白水平与模型组相比显著降低,血糖水平从52周龄起显著降低;在36周龄时模型组大鼠血浆粘度、甘油三酯、肾小球硬化指数及肾小管间质纤维化指数均显著高于空白组;糖肾方能显著降低模型组大鼠血浆粘度,效果优于蒙诺,蒙诺组能显著降低模型组大鼠血清甘油三酯水平,优于糖肾方。两给药组对模型组大鼠肾小球硬化指数与肾小管间质纤维化指数均有显著降低作用;56周龄时模型组大鼠胆固醇、甘油三酯、全血粘度高切与低切,血浆粘度,尿素氮、肾小球硬化指数及肾小管间质纤维化指数均显著高于空白组,血清总蛋白与白蛋白水平均显著低于空白组,糖肾方大剂量组能显著降低模型动物全血粘度高切与低切,血浆粘度,胆固醇,升高血清总蛋白与白蛋白水平,降低肾小球硬化指数和肾小管间质纤维化指数,各给药组对模型组大鼠尿素氮无明显影响。结论1.糖肾方能够降低1型糖尿病肾病尿蛋白排泄,改善肾组织病理损伤,其作用机制与纠正脂代谢紊乱及血液流变学异常有关,但与血糖相关性不强。2.细胞外基质积聚是糖尿病肾病发病的重要环节。糖肾方能抑制1型糖尿病肾病大鼠TGF-β1mRNA与蛋白表达,升高MMP-9 mRNA表达,减少细胞外基质主要组分Ⅳ型胶原的表达,这可能是其对1型糖尿病肾病大鼠保护作用的重要机制。3.糖肾方能降低2型自发性糖尿病肾病模型OLETF大鼠早期与中晚期24h尿蛋白水平,显著改善肾小球与肾小管间质病理改变,有着良好的肾保护作用。纠正糖、脂代谢紊乱与血液流变学异常是其可能的作用环节。4.纠正脂代谢紊乱和血液流变学异常可能时糖肾方防治1型与2型糖尿病肾病的共同作用机制。