论文部分内容阅读
本试验旨在研究牛至提取物的体外抑菌效果及对黄羽肉鸡生长性能和肠道屏障功能的影响。体外试验以牛至提取物的主要成分百里香酚和香芹酚为研究对象,探究其对禽致病性大肠杆菌O78和鸡白痢沙门氏菌的生长曲线、总酸泄露、菌体泳动能力和生物膜形成能力等指标的影响。动物试验选取健康且体重一致的1日龄快速型黄羽肉鸡公雏720只,按照单因子试验设计随机分为4个处理组,每个组6个重复,每个重复30只鸡:CON组（基础日粮）、OE200组（基础日粮+200 mg/kg牛至提取物）、OE400组（基础日粮+400 mg/kg牛至提取物）、OE600组（基础日粮+600 mg/kg牛至提取物）,试验期为48天。体外试验结果表明:（1）百里香酚对禽致病性大肠杆菌O78和鸡白痢沙门氏菌的最低抑菌浓度（MIC）均为0.25 mg/m L;香芹酚对禽致病性大肠杆菌O78和鸡白痢沙门氏菌的MIC均为0.5 mg/m L。（2）亚MIC浓度的百里香酚或香芹酚能抑制禽致病性大肠杆菌O78和鸡白痢沙门氏菌的生长,使得两种菌进入指数期的时间延后,生长缓慢且稳定期活菌数低于正常培养。（3）百里香酚或香芹酚可以抑制禽致病性大肠杆菌O78和鸡白痢沙门氏菌生物膜的形成。（4）百里香酚或香芹酚可以抑制禽致病性大肠杆菌O78和鸡白痢沙门氏菌的菌体泳动能力。（5）百里香酚或香芹酚处理后,禽致病性大肠杆菌O78和鸡白痢沙门氏菌总核酸泄露量均增加。动物试验结果表明:（1）生长性能:试验前期,与对照组相比,试验组的平均日采食量（ADFI）、平均日增重（ADG）呈线性和二次曲线显著升高（P＜0.05）。试验中期,OE200组的ADFI显著低于对照组（P＜0.05）;OE400组的ADG显著高于其他组（P＜0.05）;试验组的料重比（F/G）呈二次显著降低。试验后期,OE200和OE600组的ADFI显著低于对照组。试验全期,OE200组和OE400组的ADG显著高于对照组;试验组的F/G呈线性和二次显著降低。（2）血清生化指标:在21日龄时,OE600组的血清谷草转氨酶（AST）活性显著低于对照组（P＜0.05）;OE600组的血清总胆固醇（TC）含量显著低于对照组（P＜0.05）;添加不同剂量牛至提取物对各组肉鸡的血总蛋白（TP）、谷丙转氨酶（ALT）、甘油三酯（TG）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）和低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）水平均没有显著差异（P＞0.05）。在48日龄时,与对照组相比,试验组血清TP含量呈线性和二次曲线显著升高（P＜0.05）;试验组的AST的活性呈线性显著升高（P＜0.05）;添加不同剂量牛至提取物对各组肉鸡的血清ALT、TC、TC、HDL-C和LDL-C水平均没有显著差异（P＞0.05）。（3）消化酶活性:OE400组和OE600组的21d空肠淀粉酶活性显著高于对照组（P＜0.05）,OE200组的21d空肠淀粉酶活性显著低于其他组（P＜0.05）;试验组的21d空肠脂肪酶活性呈线性显著降低（P＜0.05）;OE200和OE600组的21d糜蛋白酶活性显著高于对照组（P＜0.05）。（4）空肠黏膜抗氧化性能:在第21日龄,OE600组的空肠黏膜总抗氧化能力（T-AOC）显著高于对照组（P＜0.05）;OE400组和OE600组的空肠黏膜超氧化物歧化酶（SOD）活性显著高于对照组（P＜0.05）;OE400组和OE600组的空肠黏膜过氧化氢酶（CAT）活性显著高于对照组（P＜0.05）;OE400组的空肠黏膜丙二醛（MDA）含量显著高于对照组和OE200组（P＜0.05）。在第48日龄,各组空肠黏膜T-AOC没有显著差异（P＞0.05）;OE600组的空肠黏膜SOD活性显著高于对照组（P＜0.05）;试验组的空肠黏膜CAT活性呈二次曲线显著降低（P＜0.05）;OE600组和OE400组空肠黏膜MDA含量显著高于对照组和OE200组（P＜0.05）。（5）肠道通透性:在第21日龄,OE600组的血清二胺氧化酶（DAO）含量显著低于其他组（P＜0.05）;在第48日龄,OE600组的血清DAO含量显著低于其他组（P＜0.05）,OE400组和OE600组血清DAO含量显著高于对照组（P＜0.05）。（6）肠道形态:在第21日龄,OE400组的空肠绒毛高度显著高于对照组和OE600组（P＜0.05）;OE200组和OE400组的空肠隐窝深度值显著低于对照组（P＜0.05）OE200组和OE400组的绒隐比显著高于对照组（P＜0.05）。在第48日龄,与对照组相比,试验组的空肠绒毛高度呈二次曲线显著降低（P＜0.05）,OE400组的空肠绒毛高度显著高于OE200组和OE600组（P＜0.05）;OE400组和OE600组的空肠隐窝深度低于对照组和OE200组（P＜0.05）,且OE400组的空肠隐窝深度显著低于OE600组（P＜0.05）;OE400组的绒隐比显著高于其他组（P＜0.05）,OE200组的绒隐比显著低于对照组和OE600组（P＜0.05）。（7）肠道紧密连接蛋白:在第21日龄,试验组的空肠ZO-1和Claudin-1表达量呈二次曲线显著升高（P＜0.05）;OE200组的Occludin表达量显著高于对照组和OE600组（P＜0.05）。在第48日龄,试验的空肠ZO-1和Occludin的表达量呈二次曲线显著降低（P＜0.05）;OE600组的空肠Claudin-1表达量显著低于其他组（P＜0.05）。（8）肠道转运载体:在第21日龄,OE200组的空肠PEPT1表达量显著高于其他组（P＜0.05）,OE400组的PEPT1表达量显著低于对照（P＜0.05）;OE600组的CAT1表达量显著低于其他组（P＜0.05）;试验组的EAAT3表达量呈线性显著升高（P＜0.05）;OE200组和OE400组的SGLT1和GLUT2表达量显著高于对照组和OE600组（P＜0.05）;OE400组和OE600组的FATP4表达量低于对照组和OE200组（P＜0.05）。在第48日龄,OE600组的PEPT1、EAAT3、GLUT2、SGLT1和FATP4表达量显著高于其他组（P＜0.05）;OE200组和OE400组的PEPT1、EAAT3和GLUT2表达量显著低于对照组（P＜0.05）;试验组的CAT1表达量呈线性和二次曲线显著降低（P＜0.05）;OE200组的SGLT1表达量显著低于对照组（P＜0.05）;OE200组的FATP4表达量显著低于对照组（P＜0.05）。（9）盲肠微生物多样性:OE400组的Ace指数和Chao1指数显著高于其他组（P＜0.05）。Anosim分析和PCoA表示,试验组盲肠微生物菌群结构均区别于对照组（P＜0.05）,OE400组与OE200组和OE600组盲肠微生物菌群结构差异显著（P＜0.05）,OE200组和OE600组盲肠微生物菌群结构差异不显著（P＞0.05）。LEfSe分析发现,牛至提取物显著增加了Lactobacillus、Faecalibacterium的丰度,显著降低了Negativibacillus、Bacteroides、Eisenbergiella、Intestinimonas、Flavonifractor的丰度。黄羽肉鸡盲肠微生物菌群与生长性能指标之间存在相关性:Faecalibacterium与前期、后期F/G呈显著负相关。Lactobacillus与前期ADFI、前期和全期ADG呈正相关,与前期和全期F/G呈负相关。Negativibacillus与前期、中期、全期F/G和后期ADFI呈正相关,与前期和后期ADG呈负相关。Intestinimonas与中期ADG呈正相关,与全期ADG呈负相关。Flavonifractor与前期ADFI、全期ADG呈负相关,与中期F/G呈负相关。盲肠菌群的代谢功能,OE400组的肉鸡21日龄盲肠菌群chemoheterotrophy（化学异养）和fermentation（发酵）代谢途径增强。通过上述研究表明,百里香酚和香芹酚处理后,禽致病性大肠杆菌O78和鸡白痢沙门氏菌的核酸泄露增加、菌体泳动能力降低、生物膜形成能力下降、生长速度下降。在黄羽肉鸡饲粮中添加牛至提取物可以通过改善肠道微生物菌群结构（如增加有益菌比例,降低有害菌比例）,增强营养物质消化吸收（如提高肠道绒毛高度、消化酶活性和转运载体的表达）,进而改善黄羽肉鸡肉鸡的生长性能（如提高平均日增重,降低料肉比）,从生长性能指标考虑,添加400 mg/kg的牛至提取物效果最佳。