论文部分内容阅读
HCMV感染在免疫功能低下人群尤其是幼儿、AIDS病人以及器官移植受者中可引起严重疾病，甚至导致患者死亡。针对免疫功能低下人群HCMV疫苗接种是保护这一人群的有效途径。HCMVgB、gH糖蛋白具有强抗原性，其序列中存在一些主要中和抗体和T细胞作用位点，故而是HCMV亚单位疫苗的优选表位。HCMVgB基因N末端（gBn）、gp116和gp55间的蛋白质裂解区（gBclv）以及HCMVgH基因N末端存在核苷酸序列差异，分析这些位点可将HCMV临床分离株分为4个gB基因型和2个gH基因型。在器官移植受者中，关于HCMVgB基因型的分布及生物学意义的研究日益增多，提示HCMVgB基因型与病毒毒力相关，可作为判断临床预后的指标之一；HCMVgB基因型分布存在一定的地域、种族差异，可能有新的基因型被发现。关于器官移植受者gH基因分型也有研究，但其生物学意义尚未阐明。在我国关于器官移植受者HCMVgB、gH基因型的研究尚未见报道。 本研究旨在了解浙江省器官移植受者HCMV分离株糖蛋白gB、gH基因型分布情况，为进一步研究HCMV的致病性、免疫性以及选择HCMV亚单位疫苗的理想表位提供依据。 本研究收集了自1999年12月至2000年9月浙江大学医学院附属第一医院肾移植、肝移植、骨髓移植受者术后1～40周外周血标本97例252份。其中骨髓移植18例98份系列血标本；肝移植20例93份系列血标本；肾移植57人份；心脏移植2例4份。所有标本经EDTA抗凝，并于采血后S小时内分离出淋巴细胞，提取基因组DNA。根据HCMVgB、gH基因序列设计六对引物，采用巢式 PCR（nestPCR，nPCR）分别扩增HCMVgBfl（54～485hp）、HCMVgBCIV（1284～1600hp）、gH（－58～230hP）核昔酸片段，扩增产物分别为431hP、316hP、288hP，扩增片段包含 HCMVgBn、nBc IV、oH基因 核苦酸变异集中位点。选择阳性产物，经纯化后直接测序，通过序列分析将其分型。分析浙江省HCMV分离株基因型分布情况。标准株参考AD 169及Towne实验株。统计学分析采用SPSS干C软件进行X‘检验。 结果显示：1．在 252份标本中，有 23例移植受者（10例 BMT，5例 LT，8例 RT） 的标本经 uPeR检山 HCMVsBn、srsc IV、sHm性。通过核昔酸及相应 氨基酸分析进行分型。16例得到nBn基因分型结果，其中nBnl型 3例（18．80），2地 1例（6．3％），3型 11例（68．8％），l、3混合 刑1例（6．3％），十见4型，gBrl基冈型分布以gBn3型为主（X’二12．286， P二0．006）；14例得到gBCIV基因分型结果，分属于gBCIVI～3型， 其中gBc VI刑8例（57．l％），2型3例（21．4％），3v3例（21．4％）， 术见 4 型，gBclv基因型早散在分布（x‘二3．571，P＝0．168）；20 例得到 gH地基冈结果，分属了 gHI～2型，其中洲 则 10例（50％）， gHZ型6例（朋％），gHI、2混合型4例（m％），gH基因型呈散在分 布（x’。400，p二0．135）。2·［［」V邓n、卯oh、咄基冈型在各移植类型间的分布米见差异。3．在 11例 HCMV临床分离株中，有 5例（45 5％）相应 vBn、nBclv基 冈地别不一致。表现为gBc Ivl－gBn3型4例，gBclvlgBnl、3型1 例。vBnZ～3型与gBc IvZ～3 F：l则呈现出对应关系。4·HCMVgB、gH基因型之间没有对应关系。 本研究结果得到如卜结论：1．浙江省器官移植受者 HCMV临床分离株，其糖蛋白基因分别属于 gB 基因型l～3型，nH基因型1～2型。nBn基因型分布以nBn3型为主。 2 gBC与 gH基因型呈散在分布。gB基因型分布与欧美等地有差异， 与日本、香港类似。HCMVgB基因型分布受到地域、种族限制。2．浙江省器官移植受者HCMVgB、gH基因型分布与移植种类无关。3．浙江省器官移植受者 HCMV临床分离株存在较多的 gBclv与 gBn基因 型别的不对应现象，提示该地区 HCMV临床株有较高频率株内基因重 组发生，是否由此导致病毒抗原性发生改变，逃避机体免疫监视， 值得进一步研究。