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目的:
1、通过形态学方法,研究细胞对镍化合物的摄取方式与状况;
2、通过检测镍染毒后细胞内镍含量的改变,探讨不溶性镍化物对靶细胞中镍含量的影响及致癌机制;
3、通过间接免疫荧光法观察不同浓度不溶性镍化物对人肺癌A549细胞内Cap43、HIF-1α蛋白的影响;
方法:
1、用不同浓度的水不溶性NiO和Ni3S2分别处理人肺癌A549细胞,来进行镍染毒细胞的制备;
2、光学显微镜及透射电镜观察细胞对不溶性镍化物的摄取状况;
3、原子吸收分光光度计检测染镍48 h后细胞内镍含量并估算其摄取率,并比较相同处理浓度下A549细胞对不同镍化合物的摄取量;
4、用不同浓度的水不溶性Ni3S2处理人肺癌A549细胞,24 h后用间接免疫荧光法观察染毒后细胞内Cap43与HIF-1α蛋白表达的变化。
结果:
1、镍染毒细胞模型制备成功2、光镜下观察所见染毒6 h后,部分镍化物即己进入细胞,并分散于细胞质中;24 h后,大部分镍化物都已进入细胞,并且产生胞吞小泡;染毒48h后,光镜观察,已经进入细胞内的镍化物大部分聚集于细胞核周围图。
3、透射电镜下观察所见染毒48 h后,经透射电镜下观察,细胞吞噬镍化合物已形成胞吞小泡,并可见其大部分均围绕在细胞核周围。
4、细胞内镍含量的测定及比较经过终浓度为0,0.5,1.0,1.5,2.0,2.5,3μg/cm2的Ni3S2处理后,平均每105个细胞中含镍量为0.0024,0.0771,0.0157,0.2268,0.4754,0.7000,0.9882μg;终浓度为0,0.5,1.0,2.0,4.0,8.0,16μg/cm2的NiO处理后,平均每105个细胞中含镍量为0.003,0.070,0.108,0.255,0.628,1.543,6.571μg;相同浓度镍颗粒物(0.5,1.0,2.0μg/cm2)处理下,Ni3S2处理组细胞镍含量分别为(0.0771±0.0066),(0.1574±0.0190),(0.4754±0.1121)μg/105个细胞,均高于NiO处理组(0.0701±0.0032),(0.1081±0.0159),(0.2552±0.0415)μg/105个细胞,各剂量组间比较差异均有统计学意义。
5、细胞内Cap43、HIF-1α蛋白的表达情况随着Ni3S2浓度的增加,细胞内Cap43与HIF-1α蛋白表达量均增加。
结论:
1、细胞对不溶性镍化合物的摄取是通过胞吞作用实现的。
2、Ni3S2、NiO染毒后A549细胞内镍含量随着处理剂量的增加,细胞内的镍含量随之增加,有一定的剂量-反应趋势,且相同处理浓度下细胞对Ni3S2的摄取率要高于NiO,可能与颗粒表面所带电荷不同有关。
3、不溶性镍化合物可引起细胞内Cap43与HIF-1α蛋白含量的增加。