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枯草芽孢杆菌纤溶酶是枯草芽孢杆菌N18分泌的碱性丝氨酸蛋白水解酶,临床上可以用于预防和治疗血栓栓塞性疾病,可用于开发新型溶栓药物。
本研究克隆了枯草芽孢杆菌纤溶酶基因(Bacillus subtilis fibdnolyfic enzyme,BSFE)及其前导肽序列,构建了微生物表达载体和植物表达载体。采用农杆菌介导转化野生型烟草和野生型拟南芥,PCR鉴定转基因植株,并利用纤维蛋白平板法检测BSFE纤溶活性。通过大肠杆菌表达了枯草芽孢杆菌纤溶酶蛋白;采用农杆菌介导转化获得转BSFE基因烟草和拟南芥,PCR检测证实BSFE基因已在转基因烟草和转基因拟南芥基因组内整合,并且通过纤溶活性检测进一步证实BSFE可在转基因烟草和转基因拟南芥体内表达,并可通过组织及根系分泌型表达,建立了植物组织及根系分泌表达外源蛋白的系统模型。
该研究为后续微生物发酵生产和产业化以及进一步阐明外源蛋白分泌表达机理和建立植物根系分泌生物反应器提供依据。