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第一部分 汉族白细胞介素-8-251A/T与+781C/T基因多态性与乳腺癌易感性研究1 背景1.1乳腺癌是由环境和遗传等多种因素共同导致的一种极其复杂的疾病,每年全球约有120万～140万妇女患乳腺癌,约50万患者死于该病。1.2随着生物工程与分子生物学技术的进步,使乳腺癌的诊断及治疗进入了基因时代,基因分析技术已被广泛应用于对乳腺癌生物特性的研究,诸多学者均在不断寻找诊治乳腺癌新的靶点。由这一研究思路指引,我们可以通过对乳腺癌患者关键基因的分析,可以将乳腺癌进行生物学预后亚型的划分,以便制定个体化的方案,提高临床疗效。1.3在人体生理、病理发生发展过程中,白细胞介素均发挥着重要的作用。已有大量研究表明白细胞介素-8(Interleukin-8)在诸如乳腺癌、结直肠癌、前列腺癌、口腔鳞状细胞癌等恶性肿瘤的发生、增殖、转移过程中均起到重要作用,并且已经证实它参与了实体肿瘤供血血管的形成与生长。1.4以往有研究发现IL-8 251A/T和+781C/T影响蛋白转录的水平,可能与疾病的发展有密切的关系,近期有研究发现IL-8 251A/T基因多态性与乳腺癌的发生有关,但是没有关IL-8-353A/T和+781C/T与乳腺癌相关性的研究。1.5诸多的研究均提示了 IL-8-251A/T同人群乳腺癌的发生、发展之间存在密切的关联性;然而,现阶段,不同实验室、学者的研究结果并不完全统一。2 目的2.1通过分析乳腺癌患者和正常对照者IL-8-251A/T,-353A/T和+781C/T的随机对照研究,分析它们与乳腺癌遗传易感性的相关性,为乳腺癌的防治提供新的基因靶点。2.2通过对乳腺癌和同期正常人群IL-8及环境因素与乳腺癌发生率的关系,为乳腺癌的预防提供新的思路。3 方法3.1本研究收集了 2014年1月至2016年7月内蒙古自治区人民医院与武汉大学人民医院442例乳腺癌患者及447例体检正常非乳腺疾患对照血清,对IL-8-251A/T,-353A/T和+781C/T与乳腺癌的相关性及IL-8、环境因素等与乳腺癌的发生的进行研究分析,并回顾meta分析了近三年内国内外数据库7个病例-对照性研究(包含了 2443例乳腺癌病例和2239例正常人)。3.2实验组依据美国癌症诊断分期标准分为两组,将早期乳腺癌患者(Ⅰ期和Ⅱ期患者)分为一组,将晚期乳腺癌患者(Ⅲ期和Ⅳ期患者)分为一组,并分别统计实验组和对照组性别,年龄,癌症家族史,是否有吸烟和酗酒等。依据是否吸烟(吸烟判断的标准:至少每天吸一支烟,连续吸烟达6个月以上)将实验组和对照组又分为吸烟组和非吸烟组,同时(饮酒的判断标准:每周饮用50 mL白酒或一瓶啤酒,连续饮用6个月以上)将癌症组和正常对照组分为酗酒组和非酗酒组。乳腺癌组和正常对照组均利用EDTA抗凝管采集外周静脉血,从全血中用苯酚氯仿法提取染色体DNA,每个标本分别用NanoDrop和凝胶电泳法定性和定量的检测DNA,检测后放置-80℃低温储存。IL-8-251A/T,-353A/T和+781C/T基因杂交后被扩增:扩增后用2%的琼脂糖凝胶电泳检测扩增结果。4结果4.1乳腺癌组患者一般缺乏或者无锻炼(X2=6.96,P=0.03),大部分有被动吸烟(X 2=8.25,P=0.004),低体重指数(t=-2.54,P=0.01),过早妊娠(t=-3.46,P=0.001)及有早期的乳腺疾患(X2=51.59,P﹤0.01)和有癌症家族史(X2=6.78,P=0.01)。4.2乳腺癌组和对照组IL-8-251A/T的TT,AT和AA出现率差异具有统计学意义(X2=12.20,P=0.002),IL-8+781C/T的CC,CT和TT出现的乳腺癌组和对照组间差异也同样具有统计学意义(X2=9.65,P=0.008)。IL-8-353A/T的AA,AT和TT基因型乳腺癌组和对照组间差异无统计学意义,IL-8-251A/T和IL-8+781C/T无哈代-温伯格平衡(HWE)的分离,而IL-8-353A/T则相反。4.3IL-8-251A/T的TT基因型与AA基因型相比较,前者与乳腺癌的发生更为密切(OR=1.96,95%CI=1.26-3.05),IL-8-251A/T的TT基因型与其隐性基因型及AA+AT基因型比较,其患乳腺癌的风险增大(OR=1.91,95%CI=1.26-2.90)。IL-8 +781C/T的TT基因型与CC基因型比较,前者患乳腺癌的风险较低(OR=0.49,95%CI=0.26-0.91),TT基因型显性与CC+CT及隐性基因型比较,前者患乳腺癌的风险降低(OR=0.46,95%CI=0.25-0.84)。IL-8-251A/T 和+781C/T基因多态性与年龄、运动锻炼、体重指数、首次妊娠的年龄及亲属癌症患病无相关性。5结论5.1乳腺癌组患者一般缺乏或者无锻炼,大部分有被动吸烟,低体重指数,过早妊娠及有早期的乳腺疾患和有癌症家族史。5.2IL-8-251A/T的TT基因型与乳腺癌的发生更为密切。5.3IL-8 +781C/T的CC、CC+CT基因型发生乳腺癌的风险高。5.4IL-8-251A/T和+781C/T基因多态性与年龄、运动锻炼、体重指数、首次妊娠的年龄及亲属癌症患病无相关性。第二部分 白细胞介素-8 251A/T基因多态性与乳腺癌易感性相关性的Meta分析1 目的在乳腺癌组织中IL-8的表达较健康乳腺组织或良性的乳腺肿瘤组织均显著增高,由此,一些学者提出,IL-8可能是一个重要的临床生物学指标,有研究发现IL-8-251A/T单核苷酸多态性同乳腺癌发生之间无显著关联,随后的分层分析结果提示,具有AA基因型的乳腺癌患者普遍对临床治疗手段不敏感,死亡率较高。诸多的研究均提示了 IL-8-251A/T同人群乳腺癌的发生、发展之间存在密切的关联性;然而,现阶段,不同实验室、学者的研究结果并不完全统一。本次研究,主要运用了 Meta分析法对所纳入文献中关于IL-8-251A/T位点与乳腺癌发病风险的不同的研究结果做综合定量评价,进一步探讨IL-8基因251A/T位点多态性和乳腺癌发病风险的相关性。2 方法采用检索EMBASE、PubMed、Cochrane Library、中国知网以及维普数据库等,①英文检索词设为:‘breast cancer;breast tumor;breast carcinoma;breast neoplasm’ and‘Interleukin-8;IL-8’and‘variant;mutation;polymorphism’;中文关键词:乳腺癌,白介素-8,基因多态性;研究对象为“人类”、“乳腺癌患者”,时间限制设定为各数据库建立至2018年1月5日。纳入主题为有关IL-8-251A/T基因多态性与乳腺癌发生风险相关文献;②研究设计为病例-对照研究;③研究文献中设置乳腺癌组与对照组,并提供IL-8-251A/T各基因型频数。需从资料中提取的内容主要包括:第一作者姓氏、种族、发表国家、发表年份、乳腺癌组例数、对照组例数、对照组来源、乳腺癌组基因型(AA、AT和TT)和对照组基因型(AA、AT和TT)频数及对照组HWE值(P值)(P<0.05认为不符合哈温伯格平衡定律)。3 结果在初次检索过程中共搜集符合要求文献386篇,随后经认真审核文献题目、、全文、数据等层层筛选、过滤后,最终剩余符合研究纳入标准的文献共7篇,包含了 2443例乳腺癌及2239例健康人。总体人群的Meta分析结果,各基因型合并OR值及其95%CI分别为:T vs.A:OR=0.90,95%CI=0.75-1.09;AT vs.AA:OR=0.88,95%CI=0.77-1.02;TT vs.AA:OR=0.81,95%CI=0.55-1.20;AT+TT vs.AA:OR=0.86,95%CI=0.70-1.05;TT vs.AT+A:OR=0.97,95%CI=0.78-1.20。以对照组来源进行亚组分析,Meta分析结果显示:各基因型合并OR值及其95%CI分别为:Tvs.A:OR=0.03,95%CI=0.70-0.98;AT+TTvs.AA:OR=0.78,95%CI=0.65-0.94。以种族进行亚组分析后,Meta 分析结果显示:各基因型合并OR值及其95%CI分别为:T vs.A:OR=0.73,95%CI=0.62-0.86;TT vs.AA:OR=0.54,95%CI=0.40-0.74;AT+TT vs.AA:OR=0.73,95%CI=0.57-0.95;TT vs.AT+A:OR=0.60,95%CI=0.46-0.77。4 结论从整体人群看,各基因遗传模型位点的多态性与乳腺癌易感性间的相关性并不显著;然而,以“种族”划分亚组进行后续分析,结果显示携带有T等位基因的非洲群体乳腺癌发生概率显著降低;以“对照组来源”划分亚组进行后续分析,结果显示携带T等位基因的人群其乳腺癌的发生率显著降低。