【摘 要】
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目的:研究PTEN缺失与否在DNA双链断裂损伤(DSBs)同源重组修复与其敲除对Rad51基因表达的作用及可能的机制。方法:半定量RT-PCR比较对照小鼠胚胎成纤维细胞PTEN+/+MEFs与PTEN
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目的:研究PTEN缺失与否在DNA双链断裂损伤(DSBs)同源重组修复与其敲除对Rad51基因表达的作用及可能的机制。方法:半定量RT-PCR比较对照小鼠胚胎成纤维细胞PTEN+/+MEFs与PTEN基因敲除的小鼠胚胎成纤维细胞PTEN-/-MEFs两种细胞内同源重组修复相关的部分基因包括Rad51, Rad51相关蛋白1 (Rad51 associated protein 1,Rad51ap1), Rad52及Rad52b mRNA表达水平的差异;免疫荧光原位杂交技术比较两种细胞γ射线照射后DNA双链断裂(DSBs)损伤程度;免疫荧光及流式细胞技术比较两种细胞稳定转染Rad52基因后同源重组修复水平的差异;克隆形成实验比较PTEN+/+MEFs与PTEN-/-MEFs细胞辐射敏感性的差异;半定量RT—PCR检测辐射后两种细胞Rad51基因表达的差异以及不同浓度LY—294002作用PTEN-/-MEFs细胞Rad51表达水平的变化。结果:同对照细胞相比,PTEN-/-MEFs细胞部分参与同源重组修复的基因Rad51, Rad51ap1,Rad52及Rad52b mRNA表达水平降低,γ射线诱导的DNA DSBs损伤水平增高,而稳定转染Rad52基因后同源重组修复缺陷部分得到矫正。同对照细胞相比,PTEN-/-MEFs细胞辐射敏感性降低,辐射后Rad51表达增强,不同浓度PI3K/AKT信号通路抑制剂LY—294002作用PTEN-/-MEFs细胞后,Rad51表达水平增高。结论:PTEN可能通过影响DNA双链断裂损伤同源重组修复相关基因Rad52等的转录,促进DNA双链断裂损伤的修复,并由此维持基因组稳定性。PTEN缺失后细胞辐射敏感性降低,Rad51表达异常,PTEN可能通过拮抗抑制PI3K/AKT信号通路对Rad51基因的转录进行调控。
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