论文部分内容阅读
本研究选择浙江赤灵芝(Ganoderma lucidum)子实体热水浸提后的灵芝渣为原料,采用高温高压强酸水解提取灵芝结构多糖,并对灵芝结构多糖水解物进行了分离纯化,将分离出的产物单体进行定性分析,并对其抗氧化及提高免疫力的生物活性等方面进行了较为系统的研究：1.以提取水溶性功能多糖后的灵芝残渣作为原料,采用高温强酸水解其中的结构多糖,获得具有显著清除自由基功能的结构多糖水解产物,对温度、时间、酸浓度等条件进行单因素优化和响应面分析优化,得到总自由基清除力最强的提取条件是温度131℃,水解时间4小时10分钟,酸浓度为0.1mol/L,此时得率为2.666%,IC50值为1.038mg/mL.在此条件下从单位质量灵芝渣所获得的总自由基清除力接近VC,略低于灵芝多糖。2.对提取出来的灵芝结构多糖水解物进行进一步的分离纯化和性质鉴定。首先采用DEAE-Sepharose Fast Flow可将灵芝结构多糖水解物分为4个组分,其中GLP1和GLP2多糖组分糖含量较高,收集并采用Sephedex G-25色谱柱对GLP1和GLP2进行纯化。通过红外光谱检测器对这两种组分的结构进行分析,发现这两种组分都具有多糖典型的吸收峰,并且初步断定为B型多糖,HPLC纯度检验表明,GLP1和GLP2均为均一的多糖组分,通过HPLC出峰时间计算出GLP1的Mn为1489D,GLP2的Mn为4913D。并对GLP和GLP1,GLP2的抗氧化能力及自由基清除力进行比较,发现分离前的提取物的抗氧化能力和自由基清除力要强于GLP1和GLP2,而GLP2的抗氧化能力强于GLP1.3.选取脾细胞和巨噬细胞两种典型模型进行试验测定GLP1和GLP2的免疫功能,具体的试验指标包括GLP1和GLP2对脾细胞的增值率,GLP对小鼠腹腔巨噬细胞活性和存活率的影响,及其对细胞产生NO,TNF-α的影响,以及对LPS诱导过的PM的活性抑制作用,结果发现,GLP1和GLP2均具有促进脾细胞增殖的作用。GLP对小鼠腹腔巨噬细胞活力基本无影响,且均可对LPS诱导的PM有增殖抑制作用,GLP2比GLP1效果更强,对于刺激小鼠腹腔巨噬细胞产生NO作用,GLP1对PM的直接刺激作用强于GLP2,但对于LPS诱导的PM, GLP2对细胞产生NO的抑制作用强于GLP1,对于小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的实验,GLP2强于GLP1,GLP直接作用于PM产生TNF-a的实验,GLP2对细胞的激活作用大于GLP1,且对LPS诱导后的细胞,GLP2对TNF-a的抑制作用强于GLP1