论文部分内容阅读
【背景】细胞凋亡是一定生理或病理刺激下细胞程序性死亡,在维持机体正常生理状态及诸多疾病的发生发展中起着重要作用。通常人们认为肿瘤细胞的增殖分化过度引起的,而如果以细胞凋亡入手来分析,可以看作是本应该在肿瘤细胞上出现的正常的凋亡作用受到抑制,机体失去了将变异的细胞清除的能力。因此对肿瘤凋亡机制的研究是研究抑癌基因的一个重要的方面。GDDR(Gastric Dramatic Down-Related)基因是杜建军博士于2002年通过抑制性消减杂交技术克隆首次发现并命名的的胃癌下调新基因。其翻译的分泌蛋白分子量为18.31kDa,特异性表达于胃肠道粘膜上皮细胞,在胃癌组织中表达下调或缺失。在我们前期细胞学和动物实验中发现,在胃肠道中GDDR与TFF1结合发挥抑制肿瘤细胞增殖的作用,但目前尚未见GDDR在胃肠道肿瘤凋亡方面作用的相关报道。本课题围绕GDDR在胃癌凋亡中的作用进行了初步探讨。【目的】在GDDR差异表达细胞系中,通过检测胃癌细胞凋亡的变化,研究GDDR在胃肠道肿瘤细胞凋亡中的作用,并探讨其相关的分子机制。【方法】复苏已构建成功的GDDR差异表达细胞系(SGC-7901-GDDR、SGC-7901-pcDNA3.1和SCG-7901),并通过siRNA转染细胞,下调GDDR的表达,real-timePCR验证上述细胞系中GDDR表达水平的差异;通过MTT的方法,筛选合适的药物及其作用方式,诱导上述细胞系凋亡的发生;在GDDR表达有差异的细胞系中,药物诱导其凋亡发生,并采用流式细胞术、Western blot检测凋亡水平及相关分子表达活化的差异;采用免疫组化染色的方法,检测不同凋亡相关分子在体内的表达活化程度。【结果】复苏并验证课题组之前构建GDDR差异表达细胞系切实可用(p<0.05);经过筛选确定5-Fu加药20μ g/mL作用48小时诱导凋亡;流式结果显示细胞凋亡率与GDDR表达正相关(p<0.05),western-blot结果显示Caspase-3活化程度与GDDR表达正相关,Bcl-2表达程度与GDDR表达负相关(p<0.05);人胃癌免疫组化染色验证和体外实验结果相符(p<0.05)。【结论】本研究证实GDDR作为一种新发现的胃癌抑癌基因,可能通过其促凋亡作用在胃肠道肿瘤中发挥着抑癌作用,这种作用有可能是通过上调Caspase-3活化水平和下调Bcl-2表达水平实现的。