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[背景和目的]胃癌是世界范围内最常见的恶性肿瘤之一,中国是胃癌高发区域,研究发现ZO-1是上皮细胞癌发生发展的机制之一。本科室前期的RT-PCR研究结果表明ZO-1α+ mRNA在胃癌组织和癌旁正常组织中的表达量未发现明显差异,而免疫组化研究结果却发现ZO-1蛋白表达的定位变化参与了胃癌的进展,即ZO-1蛋白出现了胞膜异位至胞浆的迷离表达。ZO-1包含有三个PDZ结构域、一个SH3、GUK、ABR、ZU5结构域和一个α基序,为了进一步探讨ZO-1不同功能片段在胃癌进展过程中的作用,我们选择了ZO-1(α-pan)(主要检测PDZ3、SH3结构域、GUK结构域和α基序)、ZO-1(α+)(主要检测α基序)、ZO-1(α-)(主要检测α基序剪切后连接位点两端的10个氨基酸残基)和ZO-1(H-300)(主要检测ZU5结构域),ZO-1四种不同的功能片段进行免疫组化技术染色,从而进一步探讨ZO-1的不同功能片段的表达模式与胃癌生物学行为的相关性。[方法]收集从2008年11月至2009年6月间福建医科大学附属第一医院手术的199例胃癌病例存档蜡块,制作6×5、6×4的组织芯片。组织芯片选取5个具有代表性的位点,即正常胃粘膜、粘膜层胃癌组织、肿瘤中心区胃癌组织、侵袭前沿区胃癌组织和淋巴结转移灶胃癌组织。应用免疫组织化学方法检测ZO-1(α-pan)、ZO-1(α+)、ZO-1(α-)和ZO-1(ZU5)在不同位点胃癌组织中的表达模式。[结果]1.粘膜层胃癌组织ZO-1(α-pan)、ZO-1(α+)和ZO-1(ZU5)较正常胃粘膜,出现了明显的胞膜异位至胞浆的迷离表达或不表达(P<0.05),其中ZO-1(ZU5)的迷离表达程度最重。2.进展期胃癌中ZO-1(α-pan)、ZO-1(α+)和ZO-1(ZU5)的迷离表达程度,从粘膜层胃癌到侵袭前沿区逐渐加剧,而淋巴结转移区较侵袭前沿区降低。3.进展期胃癌粘膜层胃癌组织ZO-1(α-pan)、ZO-1(α+)和ZO-1(ZU5)迷离表达水平,较早期胃癌更为加剧(P<0.05),以ZO-1(ZU5)的迷离表达水平差异最为明显。4.在粘膜层胃癌区、肿瘤中心区、侵袭前沿区和淋巴结转移区,胃癌组织的ZO-1(α-pan)、ZO-1(α+)和ZO-1(ZU5)的迷离表达程度均与组织学分型相关(P<0.05),ZO-1(ZU5)还与患者的年龄相关;在粘膜层胃癌组织中ZO-1的三个不同功能片段的表达还与年龄和浸润深度相关。5. 199例胃癌病例的粘膜层胃癌组织ZO-1(α-pan)、ZO-1(α+)和ZO-1(ZU5)表达水平进行比较发现, ZO-1(α+)与ZO-1(ZU5)的表达水平和ZO-1(α-pan)与ZO-1(ZU5)的表达水平具有明显差异(P<0.05)。6. 170例进展期胃癌的肿瘤中心区胃癌组织ZO-1(α-pan)、ZO-1(α+)和ZO-1(ZU5)表达水平进行比较发现,ZO-1(α-pan)与ZO-1(ZU5)表达水平具有明显差异(P<0.05)。7. 128例淋巴结转移区胃癌组织ZO-1(α-pan)、ZO-1(α+)和ZO-1(ZU5)表达水平进行比较发现, ZO-1(α+)与ZO-1(ZU5)的表达水平和ZO-1(α-pan)与ZO-1(ZU5)的表达水平具有明显差异(P<0.05)。8.正常胃粘膜ZO-1(α-pan)、ZO-1(α+)和ZO-1(ZU5)的表达水平不具有明显的相关性,而在粘膜层胃癌区、肿瘤中心区、侵袭前沿区和淋巴结转移区,ZO-1三个不同功能片段的相关性明显增强,粘膜层胃癌区ZO-1三个不同功能片段的相关性最强。9. ZO-1(α-)抗体来源于荷兰猪,预实验使用多种试剂盒检测,包括即用型SP检测试剂盒(美国LabVision公司产品)、即用型快速免疫组化MaxVisionTM检测试剂盒(KIT-5010,美国LabVision公司产品)、第二代通用型二步法检测系统(pv-9000,美国GBI公司产品),通用型SP系列工作液试剂盒(SP-9000,美国Zymed公司产品),大鼠两步法(非生物素)检测试剂盒(pv-6004,美国GBI公司产品),全自动多功能组织病理检测系统(Benchmark XT)试剂盒(美国VENTANA公司)等,未找到匹配的试剂盒,故无法检测。[结论]1.粘膜层胃癌组织ZO-1(α-pan)、ZO-1(α+)和ZO-1(ZU5)较正常胃粘膜出现了胞膜异位至胞浆的迷离表达或不表达,提示ZO-1的PDZ3、GUK、SH3结构域、α基序和ZU5结构域参与了胃癌的发生过程;2.进展期胃癌病例从粘膜层胃癌区至肿瘤中心区至侵袭前沿区,癌组织ZO-1(α-pan)、ZO-1(α+)和ZO-1(ZU5)的迷离表达程度逐渐加剧,提示ZO-1的PDZ3、GUK、SH3结构域、α基序和ZU5结构域是EMT发生的机制之一;3.进展期胃癌病例淋巴结转移癌中ZO-1(α-pan)、ZO-1(α+)和ZO-1(ZU5)的迷离表达程度明显低于侵袭前沿区,提示ZO-1的PDZ3、GUK、SH3结构域、α基序和ZU5结构域也可能参与MET过程;4.进展期胃癌粘膜层胃癌组织ZO-1(α-pan)、ZO-1(α+)和ZO-1(ZU5)的迷离表达程度较早期胃癌更为加剧,提示ZO-1的PDZ3、GUK、SH3结构域、α基序和ZU5结构域参与了胃癌的进展过程,以ZO-1(ZU5)的迷离表达水平差异最为明显,提示在胃癌进展过程中,ZO-1的ZU5结构域破坏和丢失的机率相对较高。5. ZO-1(α-pan)、ZO-1(α+)和ZO-1(ZU5)在胃癌不同位点区域的迷离表达程度均与组织学分型相关,提示ZO-1的PDZ3、GUK、SH3结构域、α基序和ZU5结构域参与胃癌型别的维持。6.粘膜层胃癌区和淋巴结转移区胃癌组织ZO-1(α+)与ZO-1(ZU5)的表达水平和ZO-1(α-pan)与ZO-1(ZU5)的表达水平具有显著差异(P<0.05),提示在粘膜层胃癌组织和淋巴结转移区中α基序至ZU5结构域之间的片段部分发生断裂。7.肿瘤中心区胃癌组织ZO-1(α-pan)与ZO-1(ZU5)的表达水平具有显著差异(P<0.05),ZO-1(ZU5)的平均秩小于ZO-1(α-pan),说明肿瘤中心区胃癌组织ZO-1的PDZ3结构域至ZU5结构域之间的片段部分发生断裂。