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植物酯酶(plant’esterase,P-E)与动物胆碱酯酶(choliniesterase,ChE)一样,酶活性可被有机磷(OP5)和氨基甲酸酯农药所抑制,植物酯酶(P—E)可以水解醋酸萘酯为萘酚和醋酸,萘酚与显色剂固蓝B盐反应生成紫红色偶氮化合物,从而完成显色反应。一旦植物酯酶活性被农药所抑制,就不能完成显色反应,表明样品中含有农药。 本研究使用固化的植物酯酶代替通常使用的动物胆碱酯酶。酶来源于市售面粉,向面粉中按1:5(w/v)比例加入蒸馏水,在振荡器上振荡30min,以5000r/min离心20min,上清液经滤纸过滤、滤液作为原酶液保存在4℃冰箱(或将酶液分装后在真空冷冻干燥机上冻干成酶干粉、冰冻保存),使用前稀释至一定倍数作为酶的工作液。取聚苯乙烯微孔反应板,用移液枪向每孔中加酶工作液20μL,使其均匀涂于孔壁,室温下(或4℃冰箱)自然凉干后用无离子水冲洗3次,凉干、室温干燥避光保存。微孔内壁固定有植物酯酶的塑料板称为农药酶检测器。 采用梯度稀释法在蒸馏水中分别配制1000μg/L、100μg/L、50μg/L、10μg/L、1μg/L的系列浓度的农药标准溶液,在农药检测器上分别进行抑制试验,待反应完成后,用肉眼观察显色结果,确定可分辨出的最低标准溶液浓度结果证明灵敏度为10~100μg/L。 称取不含农药的小白菜、苹果各2g,分别向其表面添加不同浓度农药,室温下凉干后,经20%甲醇提取后进行抑制试验,观察可分辨出的最低农药浓度,可得检出限为0.1~1.Omg/kg。 将农药检测器、显色剂、基质等组装成农药残留检测试剂盒。试剂盒与同类方法比较最主要的区别有三点:一是试剂盒使用的是植物酯酶代替同类方法使用的乙酰胆碱酯酶(AchE)或丁酰胆碱酯酶(BuchE),酶源广泛廉价易得:二是试剂盒使用的是固定化酶而不是同类方法使用的酶溶液,抗干扰力强;三是试剂盒使用20%甲醇作为蔬菜样品的提取溶液而不是磷酸缓冲液或水,提取效率有所提高。 试剂盒只用于有机磷和氨基甲酸酯农药检测,检出结果只是反应出这两类农药的综合残毒指标。它检出的阴性样品不表示不含有其它农药或低于检测限的有机磷和/或氨基甲酸酯农药。