论文部分内容阅读
苹果炭疽叶枯病(Glomerella cingulata)是近年来在我国苹果上新出现的一种病害,主要为害叶片和果实,导致严重落叶,果实失去商品价值,严重影响苹果产业的发展。为更深入的了解炭疽叶枯病菌的初侵染条件和初侵染菌源,本论文对于炭疽叶枯病菌的越冬部位、产孢条件、子囊孢子的形成条件和交叉侵染菌源进行了研究,目的是为病原菌的初侵染预测和防控提供依据和参考。
为了研究炭疽叶枯病菌的越冬部位,用PEG介导法构建了GFP标记的苹果炭疽叶枯病菌菌株。经测试GFP030206菌株的病原形态、生长发育速度、致病性等与野生菌株没有显著差异,可以替代野生菌株进行流行学研究。用GFP030206菌株产生的分生孢子于2018年8月份全树接种嘎啦苹果3年生盆栽幼树。越冬后于4月份采集接种树上的1年生枝条,用组织分离法培养枝条不同部位的组织,观测记录有绿色荧光菌落的数量,腋芽处病菌分离率最高,为91.18%,皮孔和表皮的分离率分别为61.11%和36.67%。将越冬枝条在人工控温控湿条件下培养5天,用无菌水冲洗枝条制成孢子悬浮液,用马丁式培养基检测孢子悬浮液中有绿色荧光孢子的浓度。结果表明,炭疽叶枯菌越冬后在10~35℃温度都能产孢,最适宜温度为30℃;越冬病菌产孢需枝条湿润或100%的相对湿度。
在人工控温控湿条件下培养嘎啦苹果炭疽叶枯病病叶,定期挑取子实体,显微镜下检查子囊和子囊孢子。结果表明,炭疽叶枯病菌在15~30℃下能都形成子囊孢子,最适产孢温度为25℃;子囊孢子的形成需要100%的相对湿度或病叶湿润。炭疽叶枯菌在25℃、30℃和20℃下分别保湿14天、16天和21天就能检测子囊孢子。此后,随时间延长,子囊数量逐渐减少,7~10天后基本消失。
从苹果、核桃、葡萄等植物上采集炭疽病菌,用单孢分离法获21个菌株。综合形态及ITS、ACT、CAPDH、CHS-1及TUB2序列鉴定,21个菌株分属于6个种:果生刺盘孢(Colletotrichum fructicola),胶孢炭疽菌(C.gloeosporioides),异国炭疽菌(C.alienum)隐秘刺盘孢(C.aenigma),海水仙刺盘孢(C.hymenocallidis)和猪毛菜刺盘孢(C.salsolae)。致病性测定表明,6个种在有伤、无伤的条件下均能导致嘎啦苹果叶片发病,间接表明苹果炭疽叶枯病菌在不同作物上存在交叉感染的可能。
为了研究炭疽叶枯病菌的越冬部位,用PEG介导法构建了GFP标记的苹果炭疽叶枯病菌菌株。经测试GFP030206菌株的病原形态、生长发育速度、致病性等与野生菌株没有显著差异,可以替代野生菌株进行流行学研究。用GFP030206菌株产生的分生孢子于2018年8月份全树接种嘎啦苹果3年生盆栽幼树。越冬后于4月份采集接种树上的1年生枝条,用组织分离法培养枝条不同部位的组织,观测记录有绿色荧光菌落的数量,腋芽处病菌分离率最高,为91.18%,皮孔和表皮的分离率分别为61.11%和36.67%。将越冬枝条在人工控温控湿条件下培养5天,用无菌水冲洗枝条制成孢子悬浮液,用马丁式培养基检测孢子悬浮液中有绿色荧光孢子的浓度。结果表明,炭疽叶枯菌越冬后在10~35℃温度都能产孢,最适宜温度为30℃;越冬病菌产孢需枝条湿润或100%的相对湿度。
在人工控温控湿条件下培养嘎啦苹果炭疽叶枯病病叶,定期挑取子实体,显微镜下检查子囊和子囊孢子。结果表明,炭疽叶枯病菌在15~30℃下能都形成子囊孢子,最适产孢温度为25℃;子囊孢子的形成需要100%的相对湿度或病叶湿润。炭疽叶枯菌在25℃、30℃和20℃下分别保湿14天、16天和21天就能检测子囊孢子。此后,随时间延长,子囊数量逐渐减少,7~10天后基本消失。
从苹果、核桃、葡萄等植物上采集炭疽病菌,用单孢分离法获21个菌株。综合形态及ITS、ACT、CAPDH、CHS-1及TUB2序列鉴定,21个菌株分属于6个种:果生刺盘孢(Colletotrichum fructicola),胶孢炭疽菌(C.gloeosporioides),异国炭疽菌(C.alienum)隐秘刺盘孢(C.aenigma),海水仙刺盘孢(C.hymenocallidis)和猪毛菜刺盘孢(C.salsolae)。致病性测定表明,6个种在有伤、无伤的条件下均能导致嘎啦苹果叶片发病,间接表明苹果炭疽叶枯病菌在不同作物上存在交叉感染的可能。