梭果黄芪有效部位及总黄酮提取纯化工艺研究

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梭果黄芪为《四川省中药材标准》2010年版收载品种,为豆科植物梭果黄芪Astragalus ernestii Comba的干燥根。其药用历史悠久,在四川地区常替代药典黄芪品种使用。主产于四川的阿坝州、甘孜州、凉山州、雅安地区和绵阳的部分县。具有补气固表,利尿托毒,排脓,敛疮生肌的功效。临床常用于气虚乏力,食少便溏,中气下陷,久泻脱肛,便血崩漏,表虚自汗,气虚水肿,痈疽难溃,久溃不敛,血虚痿黄,内热消渴;慢性肾炎蛋白尿,糖尿病。首先,分别采用小鼠强迫游泳试验、碳粒廓清试验和小鼠溶血素抗体生成试验对梭果黄芪石油醚提取部位、乙酸乙酯提取部位、正丁醇提取部位、水提取部位进行了小鼠抗疲劳活性、免疫活性的筛选,初步确定乙酸乙酯提取部位为有效部位。其次,采用系统预试法对乙酸乙酯提取部位所含化学成分进行了预实验,结果表明乙酸乙酯部位可能含有黄酮类、皂苷类成分。结合黄芪现代药理研究结果确定了黄酮类成分为抗疲劳作用的有效部位。在此基础上本文开展了总黄酮紫外分光光度法和毛蕊异黄酮苷HPLC的含量测定方法研究,建立了黄酮的评价方法。第三,开展了有效部位总黄酮提取纯化工艺研究,在提取工艺研究中以总黄酮含量、毛蕊异黄酮苷含量、浸膏得率的综合评分为评价指标,权重系数为4:4:2,对不同提取溶剂和提取方法进行了考察,在此基础上对乙醇浓度、乙醇用量、提取时间这三个因素采用L9(34)正交试验设计,并对提取次数进行考察,通过验证试验,确定了最佳提取工艺路线为:提取溶剂为70%乙醇40倍量,提取2次,每次1小时。在纯化工艺研究中采用大孔吸附树脂对梭果黄芪提取液中的总黄酮和毛蕊异黄酮苷进行纯化工艺研究,分别对不同树脂型号、上样液浓度、上样量、上样流速、洗脱溶剂及其用量进行了考察,最终确定以X-5型树脂纯化梭果黄芪提取液中的总黄酮,纯化工艺条件:上样液浓度为总黄酮4.05mg/ml、毛蕊异黄酮苷0.061mg/ml,上样量为30ml,上样流速为1.5ml/min,分别以蒸馏水3BV、50%乙醇6BV按1.5ml/min的流速洗脱,弃去蒸馏水洗脱部分,收集50%乙醇洗脱部位,经大孔树脂纯化后,总黄酮和毛蕊异黄酮苷的纯化倍数均达到3倍以上,纯化效果好。综上,本文研究确立了梭果黄芪乙酸乙酯提取部位为小鼠抗疲劳活性、免疫活性的有效部位,建立了总黄酮和毛蕊异黄酮苷的含量测定方法,以该方法为评价指标,初步完成了梭果黄芪总黄酮提取纯化工艺研究。该研究对梭果黄芪黄酮类化合物制剂、质量标准及其药动学药效学研究具有一定的参考价值,对梭果黄芪黄酮部位的深入研究和综合开发利用打下基础,为其临床规范用药提供药理学基础。
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