【摘 要】
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EB病毒（Epstein-Barr virus,EBV）是首个被发现的肿瘤相关病毒,鼻咽癌（nasopharyngeal carcinoma,NPC）的发生发展与EBV感染密切相关,复发和转移是晚期鼻咽癌治疗失败的主要原因。通过激活EBV裂解复制来靶向EBV阳性肿瘤细胞的治疗策略对晚期难治性鼻咽癌具有重要的临床价值。热休克蛋白90（heat shock protein 90,Hsp90）在包括鼻咽
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EB病毒（Epstein-Barr virus,EBV）是首个被发现的肿瘤相关病毒,鼻咽癌（nasopharyngeal carcinoma,NPC）的发生发展与EBV感染密切相关,复发和转移是晚期鼻咽癌治疗失败的主要原因。通过激活EBV裂解复制来靶向EBV阳性肿瘤细胞的治疗策略对晚期难治性鼻咽癌具有重要的临床价值。热休克蛋白90（heat shock protein 90,Hsp90）在包括鼻咽癌在内的多种肿瘤中高表达。Hsp90抑制剂可以激活未折叠蛋白反应（unfolded protein response,UPR）,影响肿瘤细胞的生长和存活。姜黄素（curcumin,CUR）是提取自姜黄根茎的具有广泛生物活性的化合物,具有显著的抗肿瘤活性,并被证明能抑制Hsp90。课题组合成的姜黄素衍生物C210对Hsp90有更强的亲和力,本课题将探讨C210对UPR信号通路的作用特点以及C210是否通过UPR信号途径影响EBV裂解激活,为开发安全、高效的新型诱导剂奠定基础。目的:探讨姜黄素衍生物C210是否通过影响UPR信号通路激活EBV裂解复制,为EB病毒相关肿瘤的靶向治疗提供重要的理论依据。方法:1.四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测C210对人鼻咽癌细胞C666-1、CNE2的增值抑制作用;2.qPCR检测C210对人鼻咽癌细胞C666-1 EBV裂解期基因（Zta、BMRF1、gp350、gp110）、EBV DNA复制以及UPR主要信号mRNA（CHOP、Trb3、BiP、XBP1s）表达的影响;3.Western Blot法检测C210对人鼻咽癌细胞C666-1 EBV裂解期蛋白（Zebra、EA-D）以及UPR主要信号蛋白（p-PERK、p-eIF2α、ATF4、CHOP、ATF6、BiP、p-IRE1α、XBP1s）表达的影响。4.使用慢病毒分别敲低人鼻咽癌细胞C666-1中PERK和XBP1,采用qPCR法检测敲低组在C210作用下EBV裂解期基因Zta、gp350 mRNA表达情况,通过Western Blot法检测敲低组在C210作用下EBV裂解期蛋白Zebra的表达情况。结果:1.C210能抑制人鼻咽癌细胞C666-1、CNE2的增殖,C210对C666-1、CNE2细胞的增殖抑制作用呈现浓度依赖性和时间依赖性。不同浓度C210作用24h、48h后,对C666-1细胞的IC50值分别为（2.94±0.38）μg/mL、（1.14±0.20）μg/mL;对CNE2细胞的IC50值分别为（3.32±0.68）μg/mL、（2.53±0.69）μg/mL。2.C210能激活EBV裂解复制。（1）EBV裂解期基因Zta、BMRF1、gp350、gp110 mRNA在一定浓度范围C210作用下随浓度增加而上调,Zta、BMRF1、gp350 mRNA在低浓度C210作用下随处理时间延长而上调,而低浓度C210对gp110 mRNA无明显影响;（2）EBV DNA拷贝数增加;（3）EBVl裂解期蛋白Zebra（Zta）、EA-D（BMRF1）表达增加。3.C210能激活UPR信号通路三个分支。（1）PERK信号通路:C210能上调下游信号CHOP、Trb3 mRNA和主要信号蛋白p-PERK、p-eIF2α、ATF4、CHOP;（2）ATF6信号通路:C210能上调下游信号BiP mRNA和主要信号蛋白ATF6、BiP;（3）IRE1信号通路:C210能上调下游信号XBP1s mRNA和主要信号蛋白p-IRE1α、XBP1s。4.C210是通过激活XBP1信号来启动EBV裂解复制周期。敲低XBP1减弱了C210激活Zta、gp350 mRNA和Zebra蛋白表达的作用,而敲低PERK对C210激活Zta和gp350 mRNA表达无明显影响,但Zebra蛋白表达增加。结论:姜黄素衍生物C210能够通过激活UPR通路的PERK信号和XBP1信号,启动EBV裂解复制周期。
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