狂犬病疫苗的安全性、有效性和质量稳定性是该制品保护效果的关键因素。各生产厂家疫苗的放行需要严格控制疫苗的效力。目前效力的检测都采用NIH法,该方法存在必须使用动物、如何判断死亡终点、需要操作活病毒、检测结果的变异系数高等缺点。效价试验(NIH法)与ELISA检测疫苗中抗原含量之间具有良好的相关性,研究结果表明,夹心ELISA方法适合于体外效价试验,有替代NIH法的趋势。目前实验室,拥有识别天然构象糖蛋白(glycoprotein,GP)的单克隆抗体,具备建立狂犬病病毒GP抗原含量双抗体夹心ELISA检测方法和开发检测试剂盒的条件。本论文进行了如下研究:ELISA方法的建立及优化目的建立可快速检测狂犬病病毒(rabies virus,RabV)糖蛋白抗原含量的双抗体夹心ELISA方法,并进行验证及初步应用。方法用抗RabV糖蛋白基因工程抗体建立双抗体夹心ELISA法,检测RabV糖蛋白抗原含量。对建立的方法进行特异性、线性、准确性、板内与板间精密性、灵敏度验证,对不同厂家(毒株分别为aG、PV、CTN、PM)生产的狂犬病疫苗与不同工艺阶段的狂犬病疫苗样品进行适用性检测。狂犬病病毒抗原检测试剂盒完成研制后,通过同一人员操作相同酶标板和不同批次的酶标板以及不同人员操作相同酶标板,检测试剂盒的板间、板内精密度。通过检测不同批次的自制狂犬病毒抗原检测试剂盒,观察试剂盒在一个月后和四个月后的检测结果是否有良好的线性关系,进而判断自制狂犬病毒抗原检测试剂盒在4℃条件下的保存时长,并验证一定时间后稳定性。结果捕获抗体与酶标抗体最佳稀释度分别为1:2000和1:4000,最佳封闭剂为1.5%BSA。该方法与其它人用疫苗和辅料成分无交叉反应。线性范围在0.0032～0.1031 IU/mL之间,R2>0.98。准确性验证的回收率在97.0%～110.1%之间。板内变异系数<8.6%,板间变异系数<13.9%。检测不同厂家的狂犬病疫苗和不同工艺阶段的疫苗样品呈良好的剂量依赖效应。同一人员操作板内精密度RSD值<15%,同一人员操作板间精密度RSD<15%,板内、板间精密度合格且良好。不同人员操作板内精密度RSD值均<15%。自制狂犬病毒抗原检测试剂盒在无论在一个月后还是四个月后检测,检测结果都呈良好的线性关系。结论建立了适用于人用狂犬病疫苗糖蛋白抗原含量检测的双抗体夹心ELISA方法,符合定量检测的需求,可用于aG、PV、CTN、PM等不同毒株生产的狂犬病疫苗检测;也可用于病毒收获液、浓缩液、灭活液及原液等不同工艺阶段样品检测。自制狂犬病毒抗原含量检测试剂盒适合不同操作人员,并且可以在4℃条件下至少保存4个月以上。