隐孢子虫（Cryptosporidium spp.）感染宿主小肠上皮细胞,是导致人和动物腹泻的重要病原之一。比较基因组学分析发现,隐孢子虫的基因组高度精简,大部分基因为单拷贝,但金属蛋白酶M16家族的胰岛素降解酶（insulinase,INS）家族却包含约20个基因,意味着该家族可能在隐孢子虫的入侵和发育过程中起一定作用。前人工作表明INS家族中的INS-20-19可能在隐孢子虫的入侵和早期发育中起重要作用,但对该家族其他成员的功能尚不了解。本研究选取分子量较小的INS21（cgd72080基因编码,56.2 kDa）和有完整结构域的INS4（cgd2930基因编码,116.2 kDa）为研究对象,研究它们在隐孢子虫入侵和生长发育中的作用。分别将以上两个目的基因与PET-28a质粒连接构建重组质粒,并将重组质粒转化至E.coli BL21中进行原核表达和纯化以获得重组融合蛋白。将纯化蛋白用作抗原免疫家兔制备多克隆抗体。通过实时荧光定量PCR技术测定目的基因在微小隐孢子虫（C.parvum）体外培养过程当中的表达情况,通过间接免疫荧光定位方法观察目的蛋白在C.parvum生活史阶段中的表达位置,并通过抗体的体外中和实验检测目的蛋白在C.parvum入侵过程中有无发挥作用。结果表明,INS21在包涵体中表达,可获得56 kDa大小的蛋白,抗体效价为1:16000,自然状态下在子孢子中可获得和预期大小相符的条带,侵染后2 h表达量达到最高峰,在子孢子前端和中端分布,其多克隆抗体中和效率大约为31%。INS4在上清中表达,可获得116 kDa大小的蛋白,抗体效价为1:6400,自然状态下在子孢子中可获得略小于预期大小的条带,侵染后2h表达量达到最高峰,在子孢子中端分布,其多克隆抗体中和效率大约为36%。上述结果说明,INS21和INS4可能与C.parvum的入侵或早期发育相关。研究结果为进一步了解胰岛素蛋白酶家族的生物学功能提供了帮助。