菌种是食用菌产业的重要生产资料之一,其质量优劣直接关系到食用菌产业能否良性发展。本研究以As2796、新登96、高温1号、大肥菇和宝地蘑菇五个蘑菇菌株为材料,从菌种活力、菌种纯度、菌种种性三个方面进行研究,建立了一套比较完整的菌种质量检测技术。主要结果如下: 1.菌种活力 以五个菌种在不同培养时间的菌丝为材料,测定了几个与菌种老化相关的生理生化指标,结果表明:丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性、过氧化氢酶(CAT)活性和电导率与不同培养时间的蘑菇菌种间没有显著的内在联系;而酸性磷酸酶(ACP)活性随着菌龄的增加均逐渐降低。 2.菌种纯度 以五个菌种的菌丝为材料,分别接种不同浓度的细菌,使之形成隐性污染。设计一对细菌16S rDNA的高度保守区序列的引物对细菌和蘑菇进行扩增;结果表明,细菌扩增产物为1500 bp,而蘑菇没有扩增产物;同时,对细菌16SrDNA PCR扩增的灵敏度进行检测,结果表明,PCR最低能检测1pg大肠杆菌DNA。最后,利用平板划线法、液体培养法、煮沸PCR扩增法和液氮冷冻—高温水浴—溶菌酶破壁PCR扩增法进行隐性污染的检测,结果表明:平板划线法和煮沸PCR扩增法较另外两种效果好。 3.菌种种性 以五种蘑菇的DNA为材料,进行核糖体RNA转录间隔序列(ITS)扩增、酶切、测序,结果表明,新登96和宝地蘑与另外三个差异明显。同时进行随机引物扩增多态性(RAPD)和相关序列扩增多态性(SRAP)扩增,结果从200个RAPD引物中筛选了4个,从153个SRAP引物中筛选了22个引物。在这些筛选出的引物中能找出每个菌株所特有的稳定性好、重复性高的指纹图谱,建立了菌种鉴别的方法。