HIV-1 CRF07_BC基因重组的演化规律及CRF07_BC/CRF01_AE二代重组特征研究

来源 :昆明理工大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:tomzhang155
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艾滋病即获得性免疫缺陷综合征(AIDS),是由人类免疫缺陷病毒(HIV)引起的全球性流行性疾病,严重危害着人类的健康。我国云南省地处西南边陲,与东南亚地区接壤,HIV-1毒株从周边国家的多途径传入与传播、多种亚型的共同流行以及基因型间重组的不断发生,导致云南省一直是我国HIV-1重组的重点区域。CRF07_BC是20世纪90年代初在中国西南地区IDU人群中发现的HIV-1B’和C亚型的重组变体,通过IDU和异性恋人群传播到我国其他地区,近年来,发现CRF07_BC的传播链逐渐从IDU人群转向MSM人群,并且呈现出更大的传播风险,在我国多地区快速扩散并流行。CRF01_AE是第一个被鉴定的HIV-1流行重组型,主要通过MSM和异性传播人群在我国快速流行。HIV-1的重组不管是断点的位置还是重组片段的大小,遵循着“由简单到复杂”的模式与规律。CRF07_BC具有复杂多样的重组模式,是以C亚型为骨架片段,插入5个片段的B’亚型,有10个重组位点。尽管CRF07_BC的流行呈现出传播速度快,性传播为主要传播人群的转换和重组复杂多样的流行特征,然而,目前对于CRF07_BC的重组演化规律如何?CRF07_BC和CRF01_AE的二代重组毒株的重组特征如何?目前少有报道。基于此,本论文针对2018-2021年间5923例HIV-1样本阐述基因型流行特征,遴选CRF07_BC邻近簇B/C新型重组体以探索CRF07_BC重组的演化规律,以及CRF07_BC与CRF01_AE共同流行形成二代重组体进行重组特征研究分析。首先,我们收集了2018-2021四年间云南省5923例艾滋病患者的血液样本以及pol区1.2kb序列,根据1.2kb序列对其进行基因分型。研究发现从5923例HIV-1样本整体来看,CRF08_BC占比居高有37.9%(2254/5923)、CRF01_AE和CRF07_BC分别占比17.98%(1065/5923)和14.47%(857/5923)、C亚型8.04%(476/5923)、B亚型3.49%(207/5923)、CRF55_01B 0.61%(36/5923)以及URFs有17.51%(1037/5923)。URFs中主要是以B/C重组有16.92%(1002/5923),剩余是CRF01_AE/B重组仅0.59%(35/5923),且URFs_BC中与CRF07_BC相关URFs有6.96%(412/5923)。进一步遴选493例与CRF07_BC重组相关URFs_BC样本进行gag-pol区2.6kb的扩增,其中402例扩增成功。为了有针对性的进行CRF07_BC的演化规律研究,我们对2.6kb序列建树分析发现CRF07_BC邻近簇有3组疑似B/C重组样本(30例,CRF1_BC、CRF2_BC、CRF3_BC),以及发现1组疑似CRF01_AE/B/C重组样本(4例,CRF_0107)单独成簇,分别进行2.6kb序列的重组模式分析及亚基因进化树分析,发现其与CRF07_BC的pol区(HXB2:2547-3400nt)具有高度一致的B/C重组模式,共享有2个B亚型插入断点,分别是2989nt和3191nt。其次,基于上述分析结果,我们对三组疑似B/C重组样本共30例进行了近全长的扩增,成功扩增28例,分别暂命名为CRF126_BC(17例)、CRF127_BC(5例)、CRF128_BC(6例)。并进行同源进化树分析、重组模式特征分析以及人口学特征分析。CRF126_BC共有5个重组片段,包括3个C亚型骨架片段和2个B亚型插入片段分别插入在基因组的pol区和nef区;CRF127_BC共有7个重组片段,包括4个C亚型骨架片段和3个B亚型插入片段分别在基因组的pol区、vpu区和nef区;CRF128_BC共有9个重组片段,包括5个C亚型骨架片段和4个B亚型插入区段分别在gag区、pol区、vpr-vpu重叠区及nef区。进一步分析发现CRF126_BC、CRF127_BC、CRF128_BC及CRF85_BC与CRF07_BC重组模式紧密关联,基于基因重组位点及重组片段的高度相似性,利用Bootscanning工具由简单到复杂的的重组规律来分析CRF07_BC的演化。分析结果显示,CRF07_BC是以C亚型为骨架,插入5个片段的B亚型,它是由CRF126_BC与B亚型重组形成二代重组CRF127_BC,进而CRF127_BC与B亚型重组形成三代重组CRF85_BC,紧接着CRF85_BC与B亚型重组形成四代重组CRF128_BC,最后CRF128_BC与B亚型重组形成的复杂重组体。最后,我们对疑似新型CRF_0107(4例)样本进行基因组近全长的成功扩增并测序,通过同源进化树分析重组模式特征分析以及人口学特征分析对CRF_0107的近全长进行了表征,将这组新型重组毒株命名为CRF125_0107。由于越来越多的CRF07_BC和CRF01_AE二代重组毒株被发现报道,我们对全球已报道CRF07_BC和CRF01_AE二代重组所有近全长序列进行下载分析以探究CRF07_BC和CRF01_AE二代重组毒株的重组发展特征。研究结果发现,目前一共有9例CRFs和55例URFs,6例CRFs和38例URFs是以CRF01_AE为骨架片段,其中5例CRFs和7例URFs的CRF01_AE均来源于cluster 5,1例CRFs和25例URFs CRF01_AE片段来源于cluster 4,重组位点主要集中在基因组的pol区和env区;3例CRFs和17例URFs是以CRF07_BC为骨架片段,重组位点主要集中在基因组的env区。CRF07_BC和CRF01_AE二代重组毒株主要发生在MSM人群中,如今已经逐渐向异性恋人群传播,并且具有快速流行的趋势。综上,本论文初步推演了CRF07_BC的重组进化,对全球CRFs/URFs_0107毒株的重组骨架及片段特征进行分析,为CRF07_BC起源于云南以及演化历程提供重要依据,对我国HIV-1的防治工作以及开发针对HIV-1的有效疫苗及药物具有重要意义。
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